CFDA SE 的關(guān)鍵特性與作用機制

CFDA SE 是一種功能強大的細胞示蹤染料，廣泛應用于細胞增殖研究。它通過被動運輸進入活細胞，被胞內(nèi)酯酶轉(zhuǎn)化為熒光 CFSE，發(fā)出明亮綠光。CFSE 與細胞蛋白結(jié)合后穩(wěn)定保留，隨細胞分裂熒光均分，熒光強度減半，可用于識別不同分裂代次細胞。CFDA SE 標記非分裂細胞熒光穩(wěn)定，可持續(xù)數(shù)月，非常適合細胞群落分析。其熒光均一性優(yōu)于 PKH26，分裂后子代細胞熒光分配均衡，且能檢測多達八次甚至更多細胞分裂。

操作步驟詳解

細胞準備與處理

• 細胞選擇與培養(yǎng) ：依據(jù)研究目的挑選合適的細胞系，確保細胞狀態(tài)良好，生長處于對數(shù)生長期，在相應培養(yǎng)基中培養(yǎng)并定期換液。

• 細胞計數(shù)與濃度調(diào)整 ：準確計數(shù)細胞后，調(diào)整濃度至實驗所需范圍，如

  $1 \times 10^5$

  -

  $5 \times 10^6$

  個 / mL，以保證標記效果和后續(xù)實驗準確性。

CFDA SE 染料準備

• 染料配制 ：按試劑盒說明，將 CFDA SE 溶于無血清培養(yǎng)基或適當緩沖液，配制成工作液，濃度一般為 1 - 10 μM。根據(jù)細胞類型和實驗需求優(yōu)化濃度，避免濃度過高或過低影響標記效果。

• 染料預熱 ：將配制好的染料工作液置于 37℃水浴中預熱 5 - 10 分鐘，以促進染料更好地穿透細胞膜，提高標記效率。

細胞標記過程

• 細胞與染料混合 ：將預熱后的 CFDA SE 工作液與細胞懸液按一定比例混合，輕輕吹打混勻，使細胞與染料充分接觸。通常 CFDA SE 與細胞的混合比例為 1:1 或根據(jù)實驗需求調(diào)整。

• 標記孵育 ：將混合好的細胞與染料置于 37℃、5% CO? 的細胞培養(yǎng)箱中孵育 10 - 20 分鐘，使 CFDA SE 充分進入細胞并被酯酶轉(zhuǎn)化為 CFSE。孵育時間不宜過長，以免細胞因缺氧等原因提前凋亡或影響后續(xù)實驗。

細胞洗滌與后續(xù)培養(yǎng)

• 洗滌去除未結(jié)合染料 ：孵育結(jié)束后，用預冷的含有血清的培養(yǎng)基洗滌細胞 2 - 3 次，以去除未結(jié)合的 CFDA SE 染料。洗滌過程中動作要輕柔，避免細胞聚集或損傷。

• 細胞重懸與培養(yǎng) ：將洗滌后的細胞重懸于適量的培養(yǎng)基中，調(diào)整細胞濃度至合適范圍，進行后續(xù)實驗，如細胞增殖實驗或細胞移植實驗等。

結(jié)果檢測與分析

流式細胞儀檢測

• 儀器設置與參數(shù)調(diào)整 ：使用流式細胞儀檢測細胞熒光強度，設置激發(fā)波長為 488 nm，檢測綠色熒光（FL1 通道）。根據(jù)細胞熒光強度的不同，區(qū)分未分裂細胞和不同分裂代次的細胞。

• 數(shù)據(jù)采集與分析 ：采集熒光強度數(shù)據(jù)，通過流式細胞儀軟件進行分析。根據(jù)熒光強度的分布，計算不同分裂代次細胞的比例，從而評估細胞的增殖情況。通常，未分裂細胞具有最高的熒光強度，每分裂一次熒光強度減半。

熒光顯微鏡觀察

• 顯微鏡設置與觀察 ：在熒光顯微鏡下觀察細胞的熒光標記情況，使用激發(fā)波長為 488 - 500 nm 的藍光激發(fā)細胞，觀察細胞內(nèi)綠色熒光的分布和強度。

• 圖像拍攝與記錄 ：拍攝細胞熒光圖像，記錄細胞的標記效果和增殖情況。通過圖像分析軟件對熒光強度進行半定量分析，進一步評估細胞增殖程度。