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亞科因(武漢)生物技術(shù)有...

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CheKine™ 葡萄糖 - 6 - 磷酸(6PG)含量檢測試劑盒(微量法)

閱讀:81      發(fā)布時(shí)間:2025-5-19
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一、試劑盒概述

CheKine™ 葡萄糖 - 6 - 磷酸(6PG)含量檢測試劑盒(微量法)是一種用于檢測生物樣本中 6PG 含量的工具。6PG 是糖酵解和磷酸戊糖途徑的關(guān)鍵中間產(chǎn)物,在糖代謝中具有重要作用。通過檢測 6PG 含量,可以深入了解細(xì)胞的糖代謝狀態(tài),為代謝研究、疾病診斷等提供重要數(shù)據(jù)。

二、檢測原理

在該試劑盒中,6PG 在 6 - 磷酸葡萄糖脫氫酶的催化下與 NADP?反應(yīng)生成 6 - 磷酸葡萄糖酸和 NADPH。NADPH 在 1 - mPMS 的作用下使 WST - 8 顯橙黃色,且顏色深淺與 6PG 含量成正比。通過測定 450 nm 處的吸光值,可準(zhǔn)確計(jì)算 6PG 含量。

三、實(shí)驗(yàn)步驟

(一)樣本準(zhǔn)備

  1. 組織樣本 :稱取適量組織,用預(yù)冷生理鹽水洗滌,按質(zhì)量體積比加入裂解液,冰上勻漿后離心取上清。
  2. 細(xì)胞樣本 :收集細(xì)胞,生理鹽水洗滌后,加入裂解液吹打混勻,冰上裂解后離心取上清。
  3. 液體樣本 :血清、血漿樣本直接離心取上清;尿液等其他液體樣本過濾去除雜質(zhì)后即可檢測。

(二)試劑準(zhǔn)備

  1. 試劑配制 :按說明書配制工作液、顯色液和酶溶液,使用前充分混勻。
  2. 試劑預(yù)冷 :將配制好的試劑置于冰上預(yù)冷,減少非特異性反應(yīng)。

(三)反應(yīng)體系設(shè)置

  1. 體系構(gòu)建 :在微量反應(yīng)板中依次加入樣本、工作液、顯色液和酶溶液,輕輕混勻。
  2. 反應(yīng)條件 :37℃孵育 30 分鐘左右,使反應(yīng)充分進(jìn)行。

(四)檢測

  1. 吸光度檢測 :使用酶標(biāo)儀在 450 nm 波長下測定反應(yīng)體系的吸光值。
  2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 :用標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,以確定樣本中 6PG 的含量。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果解讀

  1. 含量計(jì)算 :根據(jù)吸光值和標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算 6PG 的含量。
  2. 結(jié)果分析 :6PG 含量可反映糖代謝狀態(tài),如在糖尿病等代謝疾病中,6PG 含量可能異常。
  3. 注意事項(xiàng) :嚴(yán)格控制反應(yīng)條件,避免交叉污染,設(shè)置對照組以確保結(jié)果的可靠性。

五、應(yīng)用領(lǐng)域

該試劑盒適用于多個(gè)領(lǐng)域,包括代謝研究、疾病研究、食品分析和生物技術(shù)等,可用于檢測動(dòng)植物組織、細(xì)胞、血清、血漿和尿液等樣本中的 6PG 含量,助力科研和實(shí)際應(yīng)用。



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