水質(zhì)細(xì)菌檢驗(yàn)箱整套裝置由采樣檢驗(yàn)箱和選購(gòu)部分-微型培養(yǎng)箱組成。可在野外或現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行采樣和檢驗(yàn)，微型培養(yǎng)箱采用交、直流兩用電源可在沒(méi)有交流電條件下使用。

采樣檢驗(yàn)箱使用方法

1、  細(xì)菌中數(shù)檢驗(yàn)方法

1. 1試驗(yàn)準(zhǔn)備：

1.1. 1水樣采集：采水容器事先滅菌或使用前用被檢水反復(fù)沖洗數(shù)次，然后采水。1.1.2移液管吸嘴的消毒：取下套在酒精燈上的支架，把支架小口端安裝在酒精燈口上， 杯放在支架上，倒入適量水，把吸嘴放入 杯內(nèi)，煮沸5-10分鐘，備用。

1.2. 肉湯營(yíng)養(yǎng)紙墊制備：

1.3. 1將小皿用酒精棉球擦拭消毒，晾干后每皿加一片紙墊。

1.2.2取肉湯安瓶一支倒人小杯內(nèi)，加入15mi蒸餾水或自來(lái)水煮沸溶解即為營(yíng)養(yǎng)肉湯。必要時(shí)。可以直接用開(kāi)水沖泡溶解。

1.2.3取盛有紙墊小皿，每皿紙墊加營(yíng)養(yǎng)肉湯1.8-2.5ml（液體充盈程度以不淹沒(méi)濾膜為宜），即為肉湯營(yíng)養(yǎng)墊，備用。

1.3檢驗(yàn)水樣：

1.3. 1細(xì)菌過(guò)濾器系統(tǒng)的組裝；從檢驗(yàn)箱中取出過(guò)濾器，將濾床 板端插入檢驗(yàn)箱前側(cè)箱壁與塑料板之間的夾縫內(nèi)，把三通管帶細(xì)塑料管一端插入濾器下面的孔內(nèi)，三通管大孔端插入20ml注射器頭下，接頭處要嚴(yán)密。備用。

1.3.2細(xì)菌過(guò)濾器的處理：用燃著的酒精棉球擦拭細(xì)菌過(guò)濾器的濾床和漏斗，待涼后，取一片濾膜，放在濾床上，裝上漏斗并擰緊。

1.3.3過(guò)濾水樣：生活飲用水為1ml，平分兩份，水源水可同時(shí)做原水1ml和稀釋50倍（箱內(nèi)50ml小瓶放入1ml被檢水源水，家50ml冷開(kāi)水或無(wú)菌水）1ml兩個(gè)稀釋度，水樣加到濾器中后使之全部覆蓋膜面，然后抽濾至水干，將阻菌濾膜面朝上貼于肉湯營(yíng)養(yǎng)墊上。注意膜與營(yíng)養(yǎng)墊之間不要有氣泡。

1.4培養(yǎng)：37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。

1.5菌落計(jì)數(shù)：計(jì)數(shù)膜上所有菌落數(shù)。

   細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法：

   細(xì)菌總數(shù)（個(gè)/ml）=膜上的平均菌落數(shù)*稀釋倍數(shù)

1. 6注意事項(xiàng)：

1.6.1 檢驗(yàn)細(xì)菌總數(shù)過(guò)程中應(yīng)盡量做到無(wú)菌操作。

1.6.2 每檢驗(yàn)完一個(gè)水樣應(yīng)用燃著的酒精棉球燒灼漏斗和濾床后，再進(jìn)行檢驗(yàn)第二個(gè)樣品。

1.6.3 每次試驗(yàn)完畢，必須用干紗布把過(guò)濾漏斗和濾床等處擦干，以免腐蝕漏斗。

2、  大腸菌群檢驗(yàn)方法：

 2.1 試驗(yàn)準(zhǔn)備： 同細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法（1.1）

 2.2 遠(yuǎn)藤營(yíng)養(yǎng)墊的制備：

  2.2.1 將小皿用酒精棉球擦拭消毒、晾干。每皿內(nèi)加一片紙墊。

  2.2.2 取遠(yuǎn)藤培養(yǎng)基安瓶一支，倒人小杯內(nèi)，從酒精棉球瓶?jī)?nèi)取出棉球擠壓1-2滴酒精于培養(yǎng)基上使其剛好濕透，用玻棒攪勻，然后加15ml冷開(kāi)水或蒸餾水，搖勻溶解即為遠(yuǎn)藤營(yíng)養(yǎng)墊。

  2.2.3 取盛有紙墊培養(yǎng)皿，每皿紙墊加遠(yuǎn)藤培養(yǎng)液1.8-2.5ml（液體充盈程度以不淹沒(méi)濾膜為宜），即為遠(yuǎn)藤營(yíng)養(yǎng)墊。

 2.3 檢驗(yàn)水樣：

  2.3.1 細(xì)菌過(guò)濾器系統(tǒng)的組裝： 同細(xì)菌總數(shù)（1.3.1） 

  2.3.2 細(xì)菌過(guò)濾器系統(tǒng)的處理： 同細(xì)菌總數(shù)（1.3.2）

  2.3.3 過(guò)濾水樣：生活飲用水，應(yīng)檢100-330ml，將被檢水樣倒入漏斗內(nèi)至上刻度線處（100ml），檢驗(yàn)330ml水量時(shí)，可過(guò)濾100ml后，再加100ml，直至濾完330ml，（如遇不易過(guò)濾水，可分2-3張膜過(guò)濾，分別貼于2-3個(gè)遠(yuǎn)藤應(yīng)營(yíng)養(yǎng)紙墊上，結(jié)果將膜上菌落數(shù)相加計(jì)算），將膜取下，小心貼于備用的遠(yuǎn)藤營(yíng)養(yǎng)紙墊上。此時(shí)應(yīng)注意勿使濾膜與營(yíng)養(yǎng)墊之間留有氣泡；檢驗(yàn)未處理的水源水，取1ml水眼個(gè)，方法：同細(xì)菌總數(shù)，不同處僅把阻菌膜貼于遠(yuǎn)藤營(yíng)養(yǎng)墊上。

2.4 培養(yǎng)：37℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18-24小時(shí)。

2.5 菌落計(jì)算： 計(jì)數(shù)膜上帶有金屬光澤或深黑色菌落。即為大腸菌數(shù)。

        大腸菌群數(shù)計(jì)算方法：

大腸菌群數(shù)（個(gè)/升）=   膜上菌落數(shù)*稀釋倍數(shù) *1000

                       被檢水樣體積(ml)

    2.6注意事項(xiàng)：同一水樣，同時(shí)檢驗(yàn)細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群時(shí)，可不處理濾器；其它項(xiàng)同細(xì)菌總數(shù)(1.6)

    3\水中腸道致病菌（沙門氏菌屬和志賀氏菌屬）檢驗(yàn)方法：

     3.1 快速檢驗(yàn)法：

      3.1.1增菌培養(yǎng)：

       3.1.1.1 直接增菌法：吸取待檢水樣10ml放入增菌瓶中，加入一小管（0.44g）沙門氏菌—志賀氏菌通用增菌培養(yǎng)基，充分振搖攪拌使其溶解。然后置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。

       3.1.1.2濃縮增菌法：吸取待檢水樣100ml（更大或更小體積的水樣，視水質(zhì)而定）通過(guò)濾膜過(guò)濾，然后將阻菌濾膜取下，放入含有一小管（0.44g）沙門氏—志賀氏菌通用增菌培養(yǎng)基的10ml增菌液中（可用被檢水或無(wú)菌蒸餾水配制增菌液）置37℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24小時(shí)。

      3.1.2 協(xié)同凝集試驗(yàn)：具體步驟見(jiàn)“協(xié)同凝集試驗(yàn)方法”。不同種類的抗原液（即不同種類的沙門氏菌、志賀氏菌增菌后的菌懸液）分別用對(duì)應(yīng)的凝集試劑進(jìn)行協(xié)同凝集試驗(yàn)，根據(jù)凝集與否判斷為陽(yáng)性或陰性。

      3.1.3 協(xié)同凝集試驗(yàn)方法：

       3.1.3.1 取0.5ml生理鹽水將協(xié)同凝集試劑溶解，用手搖勻。

       3.1.3.2 取1滴凝集試劑于載玻片上，加一滴抗原液（經(jīng)增菌液培養(yǎng)24小時(shí)的水樣），充份混勻，1-3分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。

       3.1.3.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：

          懸液*透明，出現(xiàn)大量凝塊和顆粒為++++

          透明度稍差，出現(xiàn)大量凝塊和顆粒為+++

          懸液半透明，凝塊和顆粒較少為++

          懸液不透明，有少量顆粒為+

          懸液渾濁，無(wú)顆粒出現(xiàn)為—

          ++以上為陽(yáng)性，+為可疑。

          對(duì)照：標(biāo)準(zhǔn)抗原作陽(yáng)性對(duì)照

          生理鹽水作陰性對(duì)照

      3.1.3.4 注意：協(xié)同凝集試劑應(yīng)置低溫冷凍保存，有效期3年。

     3.2 常規(guī)檢驗(yàn)方法：

      3.2.1 增菌培養(yǎng)：快速檢驗(yàn)法中的直接增菌法和濃縮增菌法相同，其中志賀氏菌的增菌時(shí)間可以為16-18小時(shí)。

      3.2.2 平板分離：取上述經(jīng)增菌的沙門氏菌、志賀氏菌培養(yǎng)液，用接種環(huán)化線接種改良SS選擇瓊脂平板，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。（如使用其它選擇培養(yǎng)基時(shí)，請(qǐng)注意對(duì)宋內(nèi)氏痢疾桿菌是否良好，還是不生長(zhǎng)或生長(zhǎng)很差）。

      3.2..3 挑選菌落接種雙糖管：每個(gè)平板挑取5個(gè)以上可疑腸道病原菌菌落，接種于雙糖鐵或三糖鐵試管培養(yǎng)基中（將克氏雙糖鐵干燥培養(yǎng)基加水煮沸溶解后分裝于塑帽試管中，3ml，高壓蒸汽滅菌或水浴100℃15分鐘后放成高層斜面，凝固后即成）。置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時(shí)。

        附：沙門氏菌屬和志賀菌屬在改良SS選擇瓊脂平板上的菌落特征：

        沙門氏菌屬，菌落呈無(wú)色透明或半透明或中間有黑心，直徑為1-3毫米（培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)時(shí)，有的菌落中心略呈微粉色，但與紅色的大腸菌菌落*不同）。

        志賀氏菌屬，菌落呈無(wú)色透明或半透明（宋氏痢疾桿菌的菌落中心有時(shí)略呈淺色），直徑1-3毫米。

       3.2..4 生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗(yàn)：

           沙門氏菌屬：在雙糖鐵或三糖鐵培養(yǎng)基上，底層變黃（分解葡萄糖產(chǎn)酸），產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣（如傷寒沙門氏菌不產(chǎn)氣），一般產(chǎn)H2S；斜面呈紅色（不分解乳糖）。用沙門氏菌多價(jià)血清或單價(jià)抗血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)，根據(jù)凝集與否判斷為陽(yáng)性或陰性。

           志賀氏菌屬：在雙糖鐵或三糖鐵培養(yǎng)基上，底層變黃（分解葡萄糖產(chǎn)酸），不產(chǎn)氣，無(wú)動(dòng)力，不產(chǎn)H2S；斜面呈紅色（不分解乳糖）。用志賀氏菌多價(jià)血清或單價(jià)血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)，根據(jù)凝集與否判斷為陽(yáng)性或陰性。