現在商品化的液相色譜柱琳瑯滿目,根據色譜柱的參數可以給我們提供一個初步的選擇,但由于各個儀器廠商的填料技術和鍵合技術都有差異,即使是C18液相色譜柱,同一品牌不同系列都有不同的功能,有能耐受低PH值的、耐受高溫、耐受純水相和適合堿性分離等等。所以在使用色譜柱之前需要好好閱讀產品說明手冊,才能找到滿意的分離條件。
C18液相色譜柱的保養(yǎng)
1.色譜柱應輕拿輕放,避免碰撞振動,放置和歸還時,相應上機人員應確認保存在合適的溶劑中,并確認色譜柱兩端的堵頭已旋緊。
2.色譜柱壓力升高時,應按照“標題三”步驟進行維護,色譜柱維護應在色譜柱檔案備注中注明。
3.當出現色譜柱峰高降低,峰寬加大或出現肩峰及柱效下降時。應按照“標題四”原則進行色譜柱再生,色譜柱再生應在色譜柱檔案備注中注明。
4.當色譜柱維護及再生后,柱效、柱壓仍然不滿足要求,則上報相關負責人,經負責人評估后認為確需報廢的應在色譜柱檔案中做好報廢記錄,報廢后的色譜柱應專門存放,以便將來可以利用其填料修復被嚴重污染的色譜柱。
C18液相色譜柱
建立新化合物分離分析方法的色譜柱選擇
根據目標分析物的分子量大小、溶解性、Pka值,以及分離要求、儀器、成本等各方面來選擇色譜柱。
(1) 根據分離目的選色譜柱,對映體分離常選擇手性柱,離子化色譜可選擇離子柱,蛋白多肽、DNA可選擇凝膠柱或離子交換柱,一般的小分子化合物可選擇普通反相柱,如C18、C8柱、苯基柱等等。
(2) 根據實際需求和設備選擇填料粒徑,普通HPLC一般選擇5μm或3.5μm粒徑的色譜柱,而UPLC則常使用1.7μm——3.5μm的色譜柱。
(3) 比表面積,高比表面積有助于分離,低比表面積更適合梯度洗脫程序。
(4) 孔徑,大分子化合物適合大孔徑,在保證比表面積的前提下,選擇孔徑大的。
(5) 鍵合相的選擇