【概述】

近年來，農(nóng)殘分析已經(jīng)發(fā)展成為一個綜合方法，用于檢測數(shù)百種可能的污染物。草藥產(chǎn)品以及茶葉的多殘留方法所面臨的挑戰(zhàn)是，來自世界各地的產(chǎn)品以及干性材料的基質(zhì)復(fù)雜性。在原材料的質(zhì)量控制過程中，由于大量潛在的農(nóng)殘污染物，必須考慮到未知的或者未申報的本地植物保護措施。

由于破碎的細(xì)胞、樹葉或者果皮中活性成分、香精油和典型高沸點天然聚合物的大量存在，在樣品制備過程中，干樹葉、水果或種子以及其他醫(yī)學(xué)用途的草藥產(chǎn)品的萃取物極其復(fù)雜。萃取樣品的*凈化可能導(dǎo)致目標(biāo)物的損失。農(nóng)藥以及其他殘留污染的完整表征，可以利用LC和GC-MS/MS進(jìn)行，以覆蓋一系列的官能團。

       本應(yīng)用報告說明了利用快速溶劑萃?。ˋSE）和凝膠滲透色譜法（GPC）進(jìn)行草藥產(chǎn)品中多農(nóng)殘分析的方法。所采用檢測和定量系統(tǒng)為TSQ8000GC-MS/MS。將200多種農(nóng)殘化合物的日常篩選方法應(yīng)用到一系列不同樣品類型上，從普通紅茶或者鼠尾草，以及茴香種子和醫(yī)學(xué)用途的藥草，到香料用途的百里香和甘菊。采用ThermoScienti?cTraceFinder定量軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和報告。

       本次分析的靈敏度要求由法規(guī)確定。茶葉和草藥產(chǎn)品中的農(nóng)殘分析遵從“食品和飼料中農(nóng)殘分析的方法驗證和質(zhì)量控制”的健康和消費者事務(wù)（SANCO）的歐洲總署法規(guī)[1]。

在CodexAlimentarius[2]中引用的這些產(chǎn)品的靈敏度要求，導(dǎo)致了大多數(shù)農(nóng)藥化合物的大殘留水平為0.01mg/kg。

【實驗/設(shè)備條件】

分析方法包括樣品處理和采用Thermo Scienti?c TriPlusRSH液體自動進(jìn)樣器進(jìn)樣。TRACEGC1310氣相色譜儀配備了即時連接、可編程控溫的PTV進(jìn)樣系統(tǒng)以及TSQ™8000三重四極桿GC-MS/MS系統(tǒng)。MRM檢測方法來自一個日常采用的ThermoScienti?cTSQQuantumXLSGC-MS/MS方法，沒有在TSQ™8000GC-MS/MS系統(tǒng)上進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化[4]。TSQ8000系統(tǒng)自動優(yōu)化采集窗口和采用定時SRM（t-SRM）優(yōu)化儀器運行周期，以獲得大靈敏度。這避免了在操作新儀器時，通常所需的長時間手動設(shè)置（圖1）。、

圖1

【實驗/操作方法】

樣品制備

采用ThermoScienti?c Dionex ASE350 快速溶劑萃取儀的快速溶劑萃取方法，萃取草藥和茶葉樣品。在正式的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)方法中說明了這個ASE方法[3]。先采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Rotavap）濃縮采集的萃取液，然后通過凝膠滲透色譜法（GPC）進(jìn)一步凈化。GPC步驟使用具有乙酸乙酯/環(huán)己烷流動相的聚苯乙烯凝膠（Bio-Beads®S-X3）。在利用Rotavap完成進(jìn)一步濃縮后，萃取液即可用于GC進(jìn)樣，主要溶劑為乙酸乙酯。

校正和線性

采用0.004μg/mL到1.0μg/mL六個校正點執(zhí)行方法的定量校正和線性檢查。該范圍代表樣品（10-2500ppb）中的0.01–2.5mg/kg分析物濃度。

對于設(shè)置校正溶液，使用了一個包含草藥產(chǎn)品中目標(biāo)農(nóng)藥化合物的儲存溶液。在標(biāo)準(zhǔn)基質(zhì)中制備校正溶液，基質(zhì)負(fù)載量相當(dāng)于使用的典型草藥萃取液。標(biāo)準(zhǔn)基質(zhì)空白包括采用標(biāo)準(zhǔn)程序萃取的檸檬皮。在應(yīng)用某個空白標(biāo)準(zhǔn)基質(zhì)之前要測試農(nóng)藥空白水平。將檸檬皮萃取液溶解在1:1的乙酸乙酯中制備標(biāo)準(zhǔn)溶液。方法校正中所有化合物的相關(guān)系數(shù)R2超過0.99（圖2）。

圖2氟氯氰菊酯的校正曲線，R2=0.9996

【實驗結(jié)果/結(jié)論】

靈敏度（LOD）

使用農(nóng)藥標(biāo)樣評估了檸檬皮標(biāo)樣中的方法檢測限。使用4ppb(pg/μL)的基質(zhì)標(biāo)樣水平，S/N值用來評估檢測限（LOD）

。表1給出基質(zhì)中的S/N值，受到洗脫基質(zhì)影響大的保留時間處選取了重要化合物。盡管這些化合物在色譜圖中基質(zhì)影響的區(qū)域洗脫，而圖3和圖4證實了對于強度大的基質(zhì)與低水平的目標(biāo)農(nóng)藥化合物，TSQ8000GC-MS/MS系統(tǒng)具有的高靈敏度。

表1基質(zhì)中所選農(nóng)藥化合物的檢測限S/N

圖3：4ppb特草定的SRM峰（左側(cè)，161.1>88.0，CE15V）和草不綠（右側(cè)，188.1>130.1，CE25V）。SRM離子對取自PesticideMethodReference,2nded.2011。[4]

圖4：4ppb對甲抑菌靈的SRM峰（左側(cè)，238.1>137.1，CE15V）和噠螨酮（右側(cè)，309.1>147.1，CE15V）。SRM離子對取自PesticideMethodReference,2nded.2011。[4]

耐用性和維護

采用日常標(biāo)準(zhǔn)運行步驟執(zhí)行GC的日常預(yù)防性維護。通過日常分析超過500個基質(zhì)樣品，使基質(zhì)持續(xù)載入系統(tǒng)，采集了圖3和圖4中的校正色譜圖。

耐用性水平意味著即使持續(xù)性載入基質(zhì)，也沒有必要短期內(nèi)清潔可拆卸的離子源。

TRACE1310GC在這里用作質(zhì)譜儀的前端，其進(jìn)樣口和檢測器的創(chuàng)新型即時連接模塊，使用戶可以快速進(jìn)入任何進(jìn)樣口部件進(jìn)行快速清潔。此外，其數(shù)分鐘內(nèi)更換整個進(jìn)樣口模塊的*能力，既可以保持GC-MS/MS系統(tǒng)正常運行，又可以延長日常維護周期。

分析精度

在常規(guī)系列的50個商業(yè)樣品中，采用重復(fù)進(jìn)樣測量了質(zhì)量控制樣品。表2給出一系列化合物的結(jié)果?？梢杂^察到對于已知的不確定農(nóng)藥化合物的相對影響，同時不受影響的化合物在這個長系列的基質(zhì)進(jìn)樣情況下，其變異系數(shù)（CV%）始終保持低于10%。

表2：檸檬皮基質(zhì)加標(biāo)的一系列60種農(nóng)藥的QC樣品的變異系數(shù)（平均7.4%，24次進(jìn)樣）

真實樣品的結(jié)果

上述方法用于分析一系列藥草、茶葉和干水果，這些樣品由于基質(zhì)效應(yīng)嚴(yán)重，控制它們的大農(nóng)殘水平是具挑戰(zhàn)性的分析任務(wù)之一。表3給出不同樣品的陽性結(jié)果，以及找到的農(nóng)藥化合物和濃度。利用至少兩個SRM譜圖檢測所有化合物，然后通過檢查校正離子比進(jìn)行確認(rèn)。濃度范圍從接近MRL水平的10mg/kg到高于法規(guī)高水平50倍的高濃度。圖5給出一個百里香樣品中已確認(rèn)農(nóng)殘檢測的示例。

表3：不同基質(zhì)樣品中找到的高于MRL水平的陽性結(jié)果

圖5：青蘋果中腈菌唑的陽性結(jié)果（0.023mg/kg，左圖）和百里香中的啶氧菌酯（0.228mg/kg，右圖），均在兩個SRM譜圖上檢測到。

數(shù)據(jù)分析和報告

采用TraceFinder定量軟件執(zhí)行數(shù)據(jù)處理。TraceFinder軟件包括一個化合物數(shù)據(jù)庫，該庫具有大量農(nóng)藥化合物條目，從這些條目中選擇方法所需的化合物。對于每個農(nóng)藥化合物，MRM采集所需的參數(shù)和化合物識別，例如SRM離子對、保留時間和離子比以及定量信息，例如定量質(zhì)量數(shù)和回收率要求，都得以保存。

從一個集成了完整分析過程的軟件平臺上進(jìn)行分析序列設(shè)置、數(shù)據(jù)采集和結(jié)果處理。在圖6中，分析序列顯示在屏幕的上半部分，方法中包括的化合物在右側(cè)。所選農(nóng)藥化合物的實際色譜圖顯示在下方，以供查看。

圖6：TraceFinder軟件分析視圖：

A：校正、QC和樣品運行的采集序列表

B：具有狀態(tài)標(biāo)記的化合物列表

C：具有積分定量和確認(rèn)峰的化合物色譜圖窗口

擴展的生產(chǎn)效率

分析運行的總周期時間為30分鐘，每個小時可完成2個樣品，總共分析48個樣品，包括白天的QC檢查，以控制每次運行中200多種農(nóng)藥化合物。

這種擴展的生產(chǎn)效率是TSQ8000三重四極桿GC-MS/MS系統(tǒng)及其基質(zhì)樣品中加強的分析物選擇性、出色的方法和系統(tǒng)耐用性、使用TraceFinder軟件的數(shù)據(jù)處理共同組合的結(jié)果。農(nóng)藥化合物峰一般為基線分離，具有很高的信噪比，支持準(zhǔn)確的自動面積積分，顯著減少了手動控制需求。TraceFinder軟件內(nèi)的一些質(zhì)量控制參數(shù)為可能需要手動積分的化合物提供了清楚的標(biāo)記。自動離子比檢查在尋找陽性結(jié)果時提供了快速而可靠的確認(rèn)。TraceFinder軟件出色的處理速度適用于多殘留分析以及每個樣品快速全面的報告生成。

結(jié)論

TSQ8000GC-MS/MS為日常農(nóng)殘分析，即使是困難的基質(zhì)樣品，也提供了高靈敏度和基質(zhì)選擇性。采用*的定時SRM功能的數(shù)據(jù)采集，在單次運行中可檢測大量農(nóng)藥化合物，無需犧牲單個化合物的高靈敏度。在標(biāo)樣基質(zhì)中執(zhí)行定量校正，在用于控制法規(guī)MRL水平的濃度范圍內(nèi)，分析結(jié)果顯示出良好的線性和精度。

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