【概述】

       肼是一種無色發(fā)煙的、具有腐蝕性和強還原性的液體化合物，它是比氨弱的堿，通常由水合肼脫水制得。它常用作制藥原料，如合成氨基尿、異yan肼、呋喃西林鹽酸阿齊利特，硫酸阿米卡星和他唑巴坦酸等，同時在肼還常用于生產多種農藥，如植物生長調節(jié)劑，落葉劑及除草劑等。肼可對肝、肼可對肝、腎、血液等系統(tǒng)產生毒副作用。有數(shù)據(jù)顯示，肼可能具有致癌作用。因此，要求藥品中肼的殘留量越來越低，如何快速、簡便、高靈敏地監(jiān)測生產過程中肼的殘留量，一直是藥物溶劑殘留檢測研究的一個問題。

       目前水合肼的的氣相色譜法一般采用直接和衍生化法。直接法是采用熱導檢測器分析，但其靈敏度低，另外水合肼是強堿性化合物，對柱子要求較高。衍生化法一般采用2，4．二硝基苯jia醛或乙酰丙酮來進行，此方法需要加額外的衍生化試劑。JamesR．Holtzelaw采用丙酮作為衍生化試劑，對空氣中存在的肼類化合物(肼、甲ji肼、偏二甲肼)進行了分析，收到了良好的效果。

【實驗/設備條件】

表1.儀器參數(shù)設置

【樣品提取】

【實驗/操作方法】

本文用丙酮乙酸作為衍生化試劑，采用頂空進樣及液體直接進樣法結合氣相色譜質譜法藥品中水合肼進行了分析，另外本文采用Time-SIM方式定量，靈敏度高，選擇性好，樣品前處理簡單。

【實驗結果/結論】

1.頂空條件的選擇

水合肼一種無色發(fā)煙的、具有腐蝕性和強還原性的液體化合物，它是比氨弱的堿，其沸點為118.5℃，因其在100℃左右分解成N2、NH3和H2，因此常采用衍生后對其進行分析，如下圖1、2為肼及其衍生后（乙酸丙酮（1 : 10））的產物的質譜圖。

圖1.水合肼的質譜圖

圖2.水合肼衍后產物的質譜圖

       水合肼衍生產物為堿性，且衍生產物沸點在110℃，易溶于水，因此該物質易采用液體直接進樣進行分析，但考慮到有些藥品不易溶于有機溶劑且極易溶于水，本方法采用頂空法及液體直接進樣法分析。由于該衍生產物的強堿性，采用頂空法時在其中加入50μL 50% NaOH水溶液，可有效的提高靈敏度，同時采用頂空分析干擾物質減少。

       本實驗選取飽和氯化鈉水溶液做溶劑，可將待分析藥品*溶解，溶劑中含大量有機溶劑因此頂空溫度不易過高，同時隨著樣品平衡溫度的升高，進入氣相的有機物的量增加，從而可以提高分析的靈敏度，由于實驗中采用水溶，孵化溫度不易過高，本實驗中主要考察了60℃、70℃、80℃、90℃的平衡溫度對靈敏度的影響，試驗結果表明選擇平衡溫度90℃時目標化合物的靈敏度大，更適宜分析。實驗中傳輸線溫度選擇130℃以保證沒有水氣帶入色譜柱，影響分析效果。

       當孵化時間增長分析物在水相和氣相兩相中的分配系數(shù)越小，當孵化時間達到一定時間分析物在兩相間達到大的分配，此時為分析時間，本實驗中考察了5 min，10min，15 min，20 min，30 min，對孵化效率的影響，實驗終結果表明，當孵化時間為15 min時效率高，隨后靈敏度達到大值，鑒于提高分析效率考慮，終選擇孵化時間15min。如下圖3為不同孵化時間下孵化效率的比較圖。

圖3.不同孵化時間下孵化效率，其中y為丙酮連氮的響應值

2.色譜柱的選擇

       已有文獻報道水合肼的分析，采用-17及624色譜柱分析.本方法采用乙酸丙酮（1 : 10）衍生法將水合肼衍生為丙酮連氮。對于不同的藥品，有些藥品為水溶性的，此時可采用頂空法分析，另外有些藥品為非水溶性的，此時可采用有機溶劑直接溶解分析。同時采用頂空法分析可以減少儀器的污染，由于水合肼衍生產物沸點較高，頂空法未顯出明顯的靈敏度優(yōu)勢。無論哪種方法通常都需要將水合肼衍生，衍生后產物丙酮連氮為堿性、極性物質，本方法考察了Tg-17 30 m×0.25μm×0.25 mm和Tg-Wax 30 m×0.25μm×0.25 mm，Tg-5 amine 30 m×0.25μm×0.25 mm,Tg-Wax B 30 m×0.25μm×0.25 mm四種不同類型色譜柱，實驗結果發(fā)現(xiàn)，當選1701及wax色譜柱時，由于衍生產物顯堿性，色譜峰有明顯的托尾，見下圖4。當分析目標化合物為堿性時，此時宜選擇堿性化處理的色譜柱。由于目標物為極性化合物，因此本方法終選擇分析色譜柱為Tg-Wax B 30 m×0.25μm×0.25 mm，色譜峰形得到明顯改善，靈敏度明顯提高，同時進樣一段時間后，色譜柱無流失。

3.標準品色譜圖及樣品加標色譜圖

水合肼為藥物生產中的副產物，本方法采用不同的方法分析水合肼，如下圖5-6分別為液體及頂空進樣方式水合肼的TIC譜圖，由此圖發(fā)現(xiàn)，當采用頂空進樣時干擾更少且靈敏度較好。本法采用T-SIM方式定量，如圖7為標準物質T-SIM譜圖及空白樣品加標色譜圖，其中下圖為樣品加標色譜圖。

圖4. 0.5μg/mL水合肼衍生后在不同類型色譜柱上的分離情況

圖5.液體進樣方式—2.0μg/mL水合肼衍生后TIC色譜圖

圖6.頂空進樣方式—2.0μg/mL水合肼衍生后TIC色譜圖

圖7.標準品、樣品加標水合肼的T-SIM色譜圖

4.線性、檢出限及RSD

頂空法：

       配制濃度分別為：0.01、0.02、0.04、0.1、0.2μg/mL的校準溶液，采用上述液體進樣方法進樣分析，考察各組分在0.01-0.2μg/mL濃度范圍內的線性。實驗結果表明該衍生物在0.01-0.2μg/mL內線性關系良好，線性相關系數(shù)0.9956，見下圖8。

       對某樣品添加混合標準溶液（加標濃度為5.0μg/g、50μg/g），考察的加標回收情況。實驗結果表明加標回收率為82.0-93.0%之間，符合日常分析檢測的要求。對5.0、50μg/g加標水平平行測定6次，平均RSD值在4.8-8.3%，符合穩(wěn)定性要求。同時以三倍信噪比計算水合肼的檢出限，測得儀器檢出限在0.01μg/mL。

圖8.為水合肼的液體進樣方式線性

液體直接進樣法：

配制濃度分別為：0.02、0.04、0.2、0.4、2.0、4.0μg/mL的校準溶液，采用上述方法分別進樣分析，考察各組分在0.02-4.0μg/mL濃度范圍內的線性。實驗結果表明該衍生物在0.02-4.0μg/mL內線性關系良好，線性相關系數(shù)均大于0.999，見下圖。

對某樣品添加混合標準溶液（加標濃度為2.0μg/g、40μg/g），考察的加標回收情況。實驗結果表明加標回收率為78.0-88.0%之間，符合日常分析檢測的要求。對2.0、40μg/g加標水平平行測定6次，平均RSD值在4.9-9.3%，符合穩(wěn)定性要求。同時以三倍信噪比計算水合肼的檢出限，測得儀器檢出限在0.02μg/mL。

圖9.為水合肼的頂空進樣方式線性

實際樣品測試結果

采用如下頂空進樣法條件測定了幾個市售藥品，其中某藥品中檢測出含有該成份水合肼，測試譜圖如下，含量為37.5μg/g。如下表為測定三個樣品結果。

表1.未知樣品測試結果

圖10.圖為某測出水合肼未知樣品TIC色譜圖

圖11.左圖為某樣品在4.37min處的質譜圖，其中右圖為NIST譜庫中水合肼的標準質譜圖

結論

本實驗采用賽默飛世爾科技Triplus 300頂空自動進樣器結合1310GC配ISQ質譜檢測器分析藥品中的水合肼，樣品通過衍生法分別采用頂空進樣方式及液體直接進樣方式，方法準確，靈敏度高，滿足檢測要求。