我們?nèi)绾蝸?lái)評(píng)價(jià)一臺(tái)紫外可見分光光度計(jì)的優(yōu)劣呢? 首先,我們要來(lái)考察它的外觀。然后,我們探討一下會(huì)對(duì)儀器的使用有很大影響的幾個(gè)重要指標(biāo):
1、 雜散光 它指不應(yīng)該有光的地方有了光。它是光譜測(cè)量中誤差的主要來(lái)源。這個(gè)值當(dāng)然越小越好了。
2、 光度準(zhǔn)確度 光度準(zhǔn)確度指實(shí)際測(cè)量的光度讀數(shù)值與真值之差。它是用戶對(duì)儀器的直接要求,每個(gè)用戶都必須重視。
3、 噪聲 噪聲也是儀器的重要指標(biāo)之一。它表征儀器的做稀溶液的能力。這個(gè)指標(biāo)也是越小越好。
4 、光譜帶寬 指從單色器射出的單色光譜線強(qiáng)度輪廓曲線的1/2高度處的譜帶寬度。表征儀器的光譜分辨率。按照比耳定律,光譜帶寬應(yīng)該是越小越好的,但是如果儀器的光源能量弱,光學(xué)傳感器的靈敏度低時(shí),光譜帶寬小了,也得不到理想的測(cè)量結(jié)果的。所以,選擇和使用儀器時(shí)一定注意。
5、 穩(wěn)定性 穩(wěn)定性是使用者zui關(guān)注的指標(biāo)之一。儀器的宗旨就是穩(wěn)定可靠,不穩(wěn)定更談不上可靠了。
6、 噪聲 噪聲也是儀器的重要指標(biāo)之一。它表征儀器的做稀溶液的能力。這個(gè)指標(biāo)也是越小越好。
7、 波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度和重復(fù)性 儀器的每個(gè)值都是在一定的波長(zhǎng)下測(cè)得的,如果所示的波長(zhǎng)和實(shí)際波長(zhǎng)偏差*,那么測(cè)出的值和真值的吻合度從何談起呢?可見這個(gè)指標(biāo)的重要性。
總之,這幾個(gè)指標(biāo)都是相互獨(dú)立又相互關(guān)聯(lián)的,每個(gè)指標(biāo)對(duì)儀器的使用都有很大影響。希望大家在選購(gòu)紫外、可見分光光度計(jì)時(shí),多做比較,多做判斷,切實(shí)找到一個(gè)穩(wěn)定可靠的好幫手。
我們選擇時(shí)需要根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的需要 ,主要考慮光學(xué)構(gòu)造和光源、檢測(cè)方法、樣品類型和數(shù)據(jù)處理等因素。
1.光學(xué)構(gòu)造
一般來(lái)說(shuō),紫外光分光光度計(jì)分為單光束和雙光束兩類。1單光束型主要是依賴單束光進(jìn)行測(cè)量。一束給定波長(zhǎng)的光通過(guò)對(duì)照物,然后再通過(guò)實(shí)際樣品溶液,就能得到吸光結(jié)果。
雙光束型則是通過(guò)一個(gè)斬光輪(mirrored chopper wheel)將一束光分成兩束,分別測(cè)量對(duì)照樣品和實(shí)際樣品。可以zui小化光漂移(lamp drift)和減少測(cè)量時(shí)間。一些雙光型光度計(jì)不利用斬光輪,而是利用一種光束分光器來(lái)代替,將一束光分成兩束平行的光然后同時(shí)測(cè)量對(duì)照樣品和目的樣品。因?yàn)樵黾恿藴y(cè)量的速度,所以雙光束分光光度計(jì)在測(cè)量一些溶液隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化的研究中大有用處。
2.樣品類型
在大部分的樣品類型中,分光光度計(jì)可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。
用小試管裝樣品容量一般從1 μl-5ml,并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來(lái)滿足各種改變需要。
3.光源和檢測(cè)方法
分光光度計(jì)的光譜也是需要考慮的一個(gè)重要因素。
紫外分光光度計(jì)一般覆蓋190nm和380nm波長(zhǎng),通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍。
有的儀器可以選擇 多種光源 :紫外光、可見光和甚至紅外光(780 nm 至3,000 nm)。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分(大約380 nm 到800 nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。
分光光度計(jì)的帶寬(bandwidth)很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度。可以投射出實(shí)驗(yàn)要求的光譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對(duì)復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測(cè)量??勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺(tái)分光光度計(jì)滿足多種實(shí)驗(yàn)需要。
分光光度計(jì)通常使用光電倍增管和光敏二極管測(cè)量吸光值。
4.樣品類型
在大部分的樣品類型中,分光光度計(jì)可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。
用小試管裝樣品容量一般從1 μl-5ml,并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來(lái)滿足各種改變需要。
5.數(shù)據(jù)管理
大部分單機(jī)型的分光光度計(jì)包含了驅(qū)動(dòng)儀器運(yùn)行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器,通常與PC機(jī)一起聯(lián)用,需要從制造商提供額外的軟件。
由此可見紫外、可見分光光度計(jì)是一種常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室分析儀器??蓮V泛用于無(wú)機(jī)物、有機(jī)物的定性、定量分析中,在科研、制藥、化工、環(huán)保、衛(wèi)生、防疫等領(lǐng)域中發(fā)揮重要的作用。