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熒光分光光度計測試需要的幾大步驟
熒光分光光度計測試需要的幾大步驟：
(一)樣品準(zhǔn)備
1.液體樣品根據(jù)用戶提供的技術(shù)指標(biāo)，檢查濃度范圍是否合適，如果需要稀釋，則要考慮所需溶劑類型和稀釋倍數(shù)。
2.固體樣品均勻粉末、片狀或具有光滑平面的塊狀樣品，均可直接測定。
(二)操作步驟
1.開機(jī)：接通電源，打開主機(jī)開關(guān)，點燃(打開)光源后，根據(jù)說明書要求啟動計算機(jī)。
2.檢測前準(zhǔn)備：參照儀器說明書，在20天內(nèi)至少進(jìn)行一次激發(fā)校準(zhǔn)和發(fā)射校準(zhǔn)，檢測前儀器應(yīng)預(yù)熱。
3.工作條件的選擇：環(huán)境溫度應(yīng)在20℃±5℃;相對濕度不大于70%;電源穩(wěn)定，無磁場、電場干擾。根據(jù)樣品的特性及熒光強(qiáng)度，選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應(yīng)時間等)。
4.基本測定
(1)熒光激發(fā)光譜測定
設(shè)置儀器參數(shù)，掃描發(fā)射波長，找到maxλem，以此為發(fā)射波長，記錄發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)波長的函數(shù)，便得到激發(fā)光譜。
(2)熒光發(fā)射光譜測定
設(shè)置儀器參數(shù)，掃描激發(fā)波長，找到maxλex，以此為激發(fā)波長，記錄發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系，便得到熒光發(fā)射光譜。
(3)差譜測定
設(shè)置熒光分光光度計參數(shù)，選擇合適的工作方式，測定背景溶液的發(fā)射光譜并儲存起來，在一定的工作方式下，掃描樣品溶液的發(fā)射波長，得到當(dāng)時的光度值和儲存的背景值之間的差示值，即差譜。
(4)峰面積積分
選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ鞣绞?，對樣品溶液進(jìn)行積分操作，即得到峰面積積分。
(5)熒光強(qiáng)度
選擇合適的測量參數(shù)，設(shè)置λex、λem，采用定點讀數(shù)或掃描方式，即可測得所選波長處的熒光強(qiáng)度。
(6)定量測定
配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在一定的測定條件下，設(shè)置λex、λem，按照由稀至濃的次序，測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，繪制熒光強(qiáng)度—濃度的工作曲線，不改變儀器參數(shù)測定未知溶液的熒光強(qiáng)度，由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。
(三)分析結(jié)果的表述
1.熒光激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及其他光譜由儀器控制電腦直接繪出。
2.峰面積積分、熒光強(qiáng)度由儀器控制電腦計算顯示。
3.定量測試：在相同的測定條件下，測定一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，繪制出熒光強(qiáng)度-濃度的工作曲線。濃度未知的溶液的熒光強(qiáng)度測定后，由工作曲線求出該溶液的濃度。