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熒光分光光度計(jì)的的結(jié)構(gòu)組成和工作原理
熒光分光光度計(jì)通常由激發(fā)光源、單色器、樣品池和檢測器等部分組成。首先,激發(fā)光源發(fā)出紫外光或藍(lán)紫光,這些光經(jīng)過濾光片后照射到樣品池中。常用的激發(fā)光源包括高壓汞燈和氙燈,它們發(fā)出的光具有穩(wěn)定性和高強(qiáng)度,能確保測量的重復(fù)性和精確度。
在樣品池中,熒光物質(zhì)吸收激發(fā)光后,從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)。這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,會(huì)迅速返回基態(tài),并在這一過程中釋放出一部分能量,以光的形式表現(xiàn)出來,即產(chǎn)生熒光。不同物質(zhì)由于其分子結(jié)構(gòu)的不同,具有各自特別的激發(fā)態(tài)能級(jí)分布,因此它們的熒光激發(fā)和發(fā)射光譜也各不相同。
熒光物質(zhì)發(fā)出的熒光經(jīng)過第二個(gè)單色器(熒光單色器)的濾過和選擇,只有特定波長的熒光能夠透過并被檢測器接收。單色器的作用在于去除不需要的光,以減少干擾,提高測量的準(zhǔn)確性。
檢測器通常采用光電倍增管,它具有高靈敏度,能夠?qū)⒔邮盏降臒晒庑盘?hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào),并進(jìn)行放大。這些電信號(hào)隨后被記錄或顯示出來,形成熒光光譜圖或數(shù)字結(jié)果。
需要注意的是,熒光分光光度計(jì)所測得的譜圖通常為表觀光譜,即未經(jīng)過校正的光譜。在大多數(shù)情況下,這種表觀光譜并不影響測試結(jié)果。但在某些特定情況下,如測量熒光量子產(chǎn)率時(shí),則需要采用經(jīng)過校正的真實(shí)光譜。
綜上所述,熒光分光光度計(jì)通過激發(fā)光源、單色器、樣品池和檢測器等部件的協(xié)同作用,實(shí)現(xiàn)了對(duì)熒光物質(zhì)的定量分析和光譜掃描。