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紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)定量、定性分析需注意的問(wèn)題
使用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行定量和定性分析需注意以下一些問(wèn)題：
吸光度讀數(shù)范圍：吸光度測(cè)量誤差在透過(guò)率過(guò)大或過(guò)小時(shí)都會(huì)變大，為了滿足定量分析的誤差要求（<5%），在定量分析時(shí)要求吸光度應(yīng)在一定的范圍內(nèi)，這個(gè)范圍的具體值與儀器性能有關(guān)，主要是與紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)檢測(cè)系統(tǒng)噪聲大小有關(guān)，但通常都在0.1~1.0范圍內(nèi)，如果儀器的檔次更低，則范圍更窄。根據(jù)朗伯比爾定律，影響吸光度大小的因素主要是樣品摩爾吸光系數(shù)，濃度和比色皿光程。實(shí)驗(yàn)中吸光度過(guò)大的樣品可通過(guò)稀釋樣品使吸光度到所需范圍內(nèi)。如果樣品不能稀釋，可以改用光程較小的比色皿減小吸光度。吸光度過(guò)小的樣品可使用光程較大的比色皿以增大吸光度。
吸收波長(zhǎng)的選擇：進(jìn)行單波長(zhǎng)測(cè)量時(shí)，需要考慮朗伯比爾定律對(duì)入射光單色性的要求和測(cè)定靈敏度的要求。沒(méi)有干擾時(shí)，一般選擇在吸收峰的zui大吸收波長(zhǎng)位置處，如果有干擾，選擇在沒(méi)有干擾且吸光度變化較平緩的位置。 進(jìn)行多波長(zhǎng)校正時(shí)，除盡量滿足單波長(zhǎng)測(cè)定的波長(zhǎng)要求外，還要求多個(gè)組分間的吸收光譜間線性無(wú)關(guān)。
狹縫的選擇：狹縫的大小會(huì)影響到儀器的信噪比和標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍。狹縫過(guò)大，通常會(huì)使線性范圍變小，特別是當(dāng)不在zui大吸收波長(zhǎng)位置測(cè)定時(shí)更是如此。狹縫過(guò)小，信噪比變差，基線平直度和測(cè)量數(shù)據(jù)的重復(fù)性會(huì)變差。此外，還需要考慮樣品吸收峰寬度的影響。通常單波長(zhǎng)測(cè)定時(shí)，一般選擇在zui大吸收波長(zhǎng)位置，線性范圍容易滿足，可選擇較寬的狹縫（1~2nm）多波長(zhǎng)測(cè)定時(shí)，很難同時(shí)在所有波長(zhǎng)都滿足線性范圍要求，應(yīng)選擇比較小的狹縫。
重復(fù)測(cè)定次數(shù)和波長(zhǎng)掃描速度：對(duì)吸光度不是很大的樣品，或者狹縫不是很小，這是檢測(cè)器檢測(cè)的光信號(hào)的強(qiáng)度是比較大的，重復(fù)性較好，可選擇較少的重復(fù)次數(shù)。相反，如果樣品吸光度很大，狹縫很小，選擇較大的重復(fù)次數(shù)可獲得更好的結(jié)果。
測(cè)定波長(zhǎng)間隔：在掃描光譜時(shí)需要選擇，可根據(jù)樣品吸收峰的寬度進(jìn)行選擇，峰寬較大時(shí)，可選擇較大的波長(zhǎng)間隔。反之亦反。通常每個(gè)正常的吸收峰應(yīng)該用不少于30個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)表示出來(lái)。