超高效液相色譜儀是一種高分離效能、高靈敏度、快速分析的液相色譜技術(shù),主要用于分析高分子化合物、蛋白質(zhì)、多肽、核酸等復(fù)雜樣品。其原理是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上,通過(guò)引入氣相色譜理論,采用小顆粒高柱效的固定相,高壓輸液泵輸送流動(dòng)相,以提高液相色譜的分離效能和速度。許多實(shí)驗(yàn)室都將傳統(tǒng)的高效液相色譜法轉(zhuǎn)換為快速的超高效液相色譜法。
有關(guān)超高效液相色譜儀的使用,建議如下:
1、開(kāi)機(jī):首先打開(kāi)儀器的主電源,等待儀器自檢完成后,雙擊桌面上軟件圖標(biāo),打開(kāi)工作站。
2、流動(dòng)相準(zhǔn)備:超高效液相色譜儀需要使用高質(zhì)量的流動(dòng)相,流動(dòng)相需要經(jīng)過(guò)過(guò)濾和脫氣處理。在使用前應(yīng)準(zhǔn)備好所需的流動(dòng)相,并確保其質(zhì)量和純度符合要求。
3、樣品處理:在進(jìn)行分析前,需要將樣品進(jìn)行處理,以適應(yīng)超高效液相色譜儀的分析要求。例如,如果樣品是固體或半固體,需要進(jìn)行萃取或研磨等處理步驟,以便將其溶解在流動(dòng)相中。
4、色譜柱安裝與平衡:在開(kāi)始分析前,需要安裝色譜柱,并進(jìn)行平衡。確保色譜柱的接口正確連接,避免出現(xiàn)漏液等問(wèn)題。平衡色譜柱是為了確保其性能穩(wěn)定,提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。
5、設(shè)置參數(shù):在開(kāi)始分析前,需要設(shè)置超高效液相色譜儀的參數(shù),例如流速、波長(zhǎng)、進(jìn)樣量等。這些參數(shù)需要根據(jù)樣品和流動(dòng)相的特性進(jìn)行選擇,以確保最佳的分析效果。
6、開(kāi)始分析:在所有準(zhǔn)備工作完成后,可以開(kāi)始進(jìn)行分析。在分析過(guò)程中,需要監(jiān)控超高效液相色譜儀的性能,如基線(xiàn)穩(wěn)定性、色譜峰形等,以確保分析結(jié)果的可靠性。
7、數(shù)據(jù)處理:分析完成后,需要處理數(shù)據(jù)以獲得所需的結(jié)果??梢允褂霉ぷ髡咀詭У能浖M(jìn)行數(shù)據(jù)處理,如峰識(shí)別、定量分析等。
8、關(guān)機(jī):完成分析后,需要按照正確的順序關(guān)閉超高效液相色譜儀。首先關(guān)閉檢測(cè)器,然后依次關(guān)閉泵和儀器電源。在關(guān)閉儀器之前,需要確保所有的管路都已經(jīng)清洗干凈,避免殘留物對(duì)儀器造成損害。
9、最后,需要定期進(jìn)行儀器維護(hù)和保養(yǎng),以確保其性能和穩(wěn)定性。
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