Biochrom30+氨基酸分析儀檢測(cè)石斑魚中水解氨基酸

摘要：

以石斑魚為原料，使用Biochrom30+全自動(dòng)氨基酸自動(dòng)分析儀對(duì)其肌肉的氨基酸組成進(jìn)行分析。結(jié)果表明石斑魚肌肉中氨基酸總量的質(zhì)量百分比為17753.114mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸總量的40.63%，鮮味氨基酸占氨基酸總量的38.52%。

• 樣品前處理

1. 所用試劑
   1. 濃鹽酸，濃度≥36%,優(yōu)級(jí)純
   2. 6mol/L 鹽酸：取500mL 鹽酸加水稀釋至1000mL,混勻。
   3. 水：去離子水
   4. 苯酚：須重蒸
   5. 17種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品

1. 前處理設(shè)備

1. 分析天平:感量分別為 0.0001g和0.00001g。
2. 水解管:耐壓螺蓋玻璃試管,體積為25mL
3. 勻漿機(jī)。
4. 無油真空泵
5. 干浴水解濃縮儀
6. 移液管
7. 0.22um濾膜

1. 樣品制備（參考國(guó)標(biāo)GB 5009.124-2016）

原料魚手工去除魚鱗、魚皮、魚刺和內(nèi)臟，采肉后清洗、瀝干，在勻漿機(jī)中打成肉糜，于-18℃冰箱中冷凍保存，分析時(shí)取出解凍后使用。

1. 試樣水解

稱取含蛋白7.5-25mg的試樣，加入水解管中，加入15mL 6mol/L鹽酸，繼續(xù)向水解管內(nèi)加入苯酚3滴~4滴。冷凍3min~5min,接到真空泵的抽氣管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮?dú)?重復(fù)抽真空-充入氮?dú)?次后,在充氮?dú)鉅顟B(tài)下擰緊螺蓋。 將水解管放入干浴水解濃縮儀中，110°C水解22-24h，冷卻、混勻、開管、轉(zhuǎn)移并定容到50ml容量瓶中，用移液管取適量樣液，在干浴水解濃縮儀中50°C吹干，必要時(shí)加入少許水，重復(fù)吹干1-2次，加入3-5mL PH2.2的稀釋上機(jī)用檸檬酸鈉緩沖液溶解,振蕩混勻后,吸取溶液通過0.22μm 濾膜后,轉(zhuǎn)移至儀器進(jìn)樣瓶,為樣品測(cè)定液,供儀器測(cè)定用。

• 分析方法描述（Biochrom 30+）
•  

1. 色譜柱：Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱，4.6´20cm
2. 分離程序：

1. 運(yùn)行時(shí)間：經(jīng)分析時(shí)間+再生時(shí)間 57min
2. 反應(yīng)單元溫度：135°C。
3. 檢測(cè)波長(zhǎng)：570nm、440nm同時(shí)檢測(cè)。

• 樣品中氨基酸含量的計(jì)算

   樣品測(cè)定液氨基酸的含量按式(2)計(jì)算:

ci = cs /As ×Ai                 ……………………(2)

式中:

ci ———樣品測(cè)定液氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

Ai ———試樣測(cè)定液氨基酸i的峰面積;

As ———氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的峰面積;

cs ———氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL)。

試樣中各氨基酸的含量按式(3)計(jì)算:

Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×10⁹) ×100 ……………………(3)

式中:

Xi ———試樣中氨基酸i的含量,單位為克每百克(g/100g);

ci ———試樣測(cè)定液中氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

F ———稀釋倍數(shù);

V ———試樣水解液轉(zhuǎn)移定容的體積,單位為毫升(mL);

M ———氨基酸i的摩爾質(zhì)量,單位為克每摩爾(g/mol);

m ———稱樣量,單位為克(g);

10⁹ ———將試樣含量由納克(ng)折算成克(g)的系數(shù);

100 ———換算系數(shù)。

附、石斑魚分析圖譜及做樣結(jié)果

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