上海乾思生物科技中心，為您精心研發(fā)、細(xì)胞株產(chǎn)品。我們就是要做一件事，服務(wù)好廣大的科研大眾。
產(chǎn)品名稱:N-Cad ELISA。
類別 :ELISA
貨期 :7-10天
N-Cad ELISA。注意事項(xiàng)：
收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí)，-20℃可保存1個(gè)月。-70度可保存6個(gè)月。部分標(biāo)本需添加抑肽酶。
1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書要求保存試劑。 實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2. 加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3. 孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4. 洗滌：洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的讀數(shù)。
5. 試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6. 反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過(guò)強(qiáng)從而影響光密度讀數(shù)。
7. 底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。
洗板方法
1. 手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
2. 自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。
液體類標(biāo)本：
標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括、、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的或。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測(cè)種類。
◇ ：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
◇ ：
應(yīng)根據(jù)的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
◇ 尿液、胸腹水、腦脊液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
◇ 細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
◇ 組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清置于-20度或- 70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
寄標(biāo)本時(shí)需注明以下情況：
1、標(biāo)本編號(hào)；2、所測(cè)項(xiàng)目；3、是否做復(fù)孔；4、實(shí)驗(yàn)后標(biāo)本是否寄回
N-Cad ELISA 安全性
1）避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。
2）實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3）不要用嘴吸取里的任何成份。
N-Cad ELISA 操作注意事項(xiàng)
1）試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
2）實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3）不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻里的各種成份及樣品。
6）洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7）底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8）加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
9）按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
N-Cad ELISA 樣品收集、處理及保存方法
1）-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2）-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3）細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5）保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
N-Cad ELISA 試劑的準(zhǔn)備
1）標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。
2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
N-Cad ELISA 操作步驟
1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2）根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3）加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8）取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9）在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
一些好評(píng)
辦事效率蠻高，幾天，就幫我搞定了這個(gè)，謝謝！盒子蠻不錯(cuò)，包含所需試劑，并提供了中英文雙版說(shuō)明書及增值稅，很，銷售人員的態(tài)度也謙和。靈敏度不錯(cuò)，重復(fù)性也行，在我做的這些實(shí)驗(yàn)中，與國(guó)內(nèi)同行的盒子相比來(lái)說(shuō)，性價(jià)比挺高的，尤其是價(jià)格占有不錯(cuò)的優(yōu)勢(shì)，贊一個(gè)！操作挺方便的，也簡(jiǎn)單，當(dāng)然，這也多虧了公司的技術(shù)人員詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，很好，謝謝，實(shí)驗(yàn)也相當(dāng)成功。實(shí)驗(yàn)出來(lái)的標(biāo)準(zhǔn)曲線很不錯(cuò)（很優(yōu)美），而且價(jià)格相對(duì)合理，技術(shù)指導(dǎo)很到位......我購(gòu)買了兩盒，批次新，保質(zhì)期內(nèi)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果做出來(lái)了，貨到的挺快，那么遠(yuǎn)，幾天就到了，加上我做實(shí)驗(yàn)，一共五天就搞定了。經(jīng)朋友介紹，購(gòu)買了此公司的ELISA，用過(guò)，還不錯(cuò)，實(shí)驗(yàn)效果很好，基本達(dá)到實(shí)驗(yàn)參數(shù)要求，如果，下次還做實(shí)驗(yàn)的話，我還買這家的，朋友這幾年都在用這家的（長(zhǎng)期訂貨）。
N-Cad ELISA 局限
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到的結(jié)果。
N-Cad ELISA 性能
1. 靈敏度：小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
N-Cad ELISA 結(jié)果判斷與分析
1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的待測(cè)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的待測(cè)物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
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