乾思 生物編輯整理：培養(yǎng)基（Medium）是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養(yǎng)基還含有抗菌素和色素?！ “此迷喜煌煞譃閮深悾簯?yīng)用肉湯、馬鈴薯汁等天然成分配制的，稱為天然培養(yǎng)基；應(yīng)用化學(xué)藥品配成并標(biāo)明成分的，稱為合成培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基?；瘜W(xué)試劑中的培養(yǎng)基，大多為合成培養(yǎng)基。由于液體培養(yǎng)基不易長(zhǎng)期保管，現(xiàn)在均改制成粉末。培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì)，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對(duì)一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基（如組織培養(yǎng)基），較長(zhǎng)時(shí)間的貯存，必須放在2~6。C的冰箱內(nèi)?！ 〕Ｒ?jiàn)培養(yǎng)基有： 1、細(xì)菌培養(yǎng)基 配方一 牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基 牛肉膏0.3克 ，蛋白胨1.0克，氯化鈉 0.5克，瓊脂 1.5克， 水 100毫升 在燒杯內(nèi)加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉，用蠟筆在燒杯外作上記號(hào)后，放在火上加熱。待燒杯內(nèi)各組分溶解后，加入瓊脂，不斷攪拌以免粘底。等瓊脂*溶解后補(bǔ)足失水，用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調(diào)整pH值到7.2～7.6,分裝在各個(gè)試管里，加棉花塞，用高壓蒸汽滅菌30分鐘。 配方二 馬鈴薯培養(yǎng)基 取新鮮牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀細(xì)細(xì)剁成肉末后，加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨。在燒杯上做好記號(hào)，煮沸，轉(zhuǎn)用文火燉2小時(shí)。過(guò)濾，濾出的肉末干燥處理，濾液pH值調(diào)到7.5左右。每支試管內(nèi)加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心，滅菌，備用?！ ∨浞饺?根瘤菌培養(yǎng)基 葡萄糖 10克 磷酸氫二鉀 0.5克 碳酸鈣 3克 硫酸鎂 0.2克 酵母粉 0.4克 瓊脂 20克 水 1000毫升 1%結(jié)晶紫溶液 1毫升 先把瓊脂加水煮沸溶解，然后分別加入其他組分，攪拌使溶解后，分裝，滅菌，備用?！ ?、放線菌培養(yǎng)基 配方一 淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏培養(yǎng)基） 可溶性淀粉 2克 硝酸鉀 0.1克 磷酸氫二鉀 0.05克 氯化鈉 0.05克 硫酸鎂 0.05克 硫酸亞鐵 0.001克 瓊脂 2克 水 100毫升 先把淀粉放在燒杯里，用5毫升水調(diào)成糊狀后，倒入95毫升水，攪勻后加入其他藥品，使它溶解。在燒杯外做好記號(hào)，加熱到煮沸時(shí)加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂*溶解后，補(bǔ)足失水。調(diào)整pH值到7.2～7.4，分裝后滅菌，備用。 配方二 面粉瓊脂培養(yǎng)基 面粉 60克 瓊脂 20克 水 1000毫升 把面粉用水調(diào)成糊狀，加水到500毫升，放在文火上煮30分鐘。另取500毫升水，放入瓊脂，加熱煮沸到溶解后，把兩液調(diào)勻，補(bǔ)充水分，調(diào)整pH值到7.4，分裝，滅菌，備用?！ ?、真菌培養(yǎng)基 配方一 薩市（Sabouraud’s）培養(yǎng)基 蛋白胨 10克 瓊脂 20克 麥芽糖 40克 水 1000毫升 先把蛋白胨、瓊脂加水后，加熱，不斷攪拌，待瓊脂溶解后，加入40克麥芽糖（或葡萄糖），攪拌，使它溶解，然后分裝，滅菌，備用。 本培養(yǎng)菌是培養(yǎng)許多種類真菌所常用的。 配方二 馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基 把馬鈴薯洗凈去皮，取200克切成小塊，加水1000毫升，煮沸半小時(shí)后，補(bǔ)足水分。在濾液中加入10克瓊脂，煮沸溶解后加糖20克（用于培養(yǎng)霉菌的加入蔗糖，用于培養(yǎng)酵母菌的加入葡萄糖），補(bǔ)足水分，分裝，滅菌，備用。 把這培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖還可用來(lái)培養(yǎng)放線菌和芽孢桿菌?！ ∨浞饺?黃豆芽汁培養(yǎng)基 黃豆芽 100克 瓊脂 15克 葡萄糖 20克 水 1000毫升 洗凈黃豆芽，加水煮沸30分鐘。用紗布過(guò)濾，濾液中加入瓊脂，加熱溶解后放入糖，攪拌使它溶解，補(bǔ)足水分到1000毫升，分裝，滅菌，備用?！ “堰@培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2～7.4，可用來(lái)培養(yǎng)細(xì)菌和放線菌。 配方四 豌豆瓊脂培養(yǎng)基 豌豆 80粒 瓊脂 5克 水 200毫升 取80粒干豌豆加水，煮沸1小時(shí)，用紗布過(guò)濾后，在濾液中加入瓊脂，煮沸到溶解，分裝，滅菌，備用?！ ?、食用菌菌種培養(yǎng)基 配方一 馬鈴薯—蔗糖--瓊脂培養(yǎng)基 20%馬鈴薯煮汁 1000毫升 蔗糖 20克 瓊脂 18克 把馬鈴薯洗凈去皮后，切成小塊。稱取馬鈴薯小塊200克，加水1000毫升，煮沸20分鐘后，過(guò)濾。在濾汁中補(bǔ)足水分到1000毫升，即成20%馬鈴薯煮汁。在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，補(bǔ)足水分，分裝，滅菌，備用。使用該培養(yǎng)基對(duì)pH值要求不嚴(yán)格，可以不測(cè)定。 配方二 綜合馬鈴薯培養(yǎng)基 20%馬鈴薯煮汁 1000 毫升 磷酸二氫鉀 3克 硫酸鎂 1.5克 葡萄糖 20克 維生素 10毫克 瓊脂 18克 先配制20%馬鈴薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各種組分，加熱溶解后補(bǔ)足水分，調(diào)整pH值到6。分裝，滅菌，備用。該培養(yǎng)基用于培養(yǎng)和保存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。 5.煙草的培養(yǎng)基 在植物組織培養(yǎng)時(shí),通過(guò)調(diào)節(jié)IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽.CTK/IAA高時(shí),愈傷組織分化芽 CTK/IAA低時(shí),分化根;CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化 愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基制備 以MS培養(yǎng)基母液為基礎(chǔ),向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL ,維生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培養(yǎng)基后,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然后加入實(shí)際配制培養(yǎng)基體積約2/3-3/4的蒸餾水,加入40g蔗糖后攪拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調(diào)整pH值至5.8-6.0.加入14g瓊脂,將鋁鍋置于電爐上,攪拌加熱使瓊脂*溶化,然后用蒸餾水定容至終體積2L,繼續(xù)加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中. 煙草葉片愈傷組織誘導(dǎo) 取一無(wú)菌培養(yǎng)皿,用解剖刀切取1-2片無(wú)菌苗葉片置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中,并用解 剖刀將葉片切成2mm2左右的小片,然后將其接種于準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基上,每瓶接種 5小片,一共接種6瓶.接種后的三角平置于24條件下黑暗培養(yǎng)1周,然后在同 樣溫度下有光照和全黑暗下培養(yǎng)3周直至愈傷組織形成（兩種情況各置3瓶）.觀 察愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果,統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率. 器官分化及植株再生培養(yǎng) 將誘導(dǎo)的愈傷組織按類型分別轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基上,置于連續(xù)光照,溫度20-22 C條件下培養(yǎng)3周,統(tǒng)計(jì)愈傷組織再生植株情況. 愈傷組織誘導(dǎo)的總體情況 煙草愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)4周后,愈傷組織基本形成,即排除因生長(zhǎng)時(shí)間不夠而 未形成愈傷的情況.具體情況見(jiàn)表一中所示,6瓶培養(yǎng)物均有愈傷形成,且都未發(fā) 生污染,但誘導(dǎo)率幾乎各不相同.其中, 在光照條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導(dǎo)率為 60.0℅, 在黑暗條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導(dǎo)率為46.7%.由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,外植 體即煙草葉片取得偏小,接種時(shí)可能已有部分外植體的大部分細(xì)胞脫水死亡,使整 個(gè)實(shí)驗(yàn)的愈傷組織誘導(dǎo)率偏低,愈傷塊偏小. 培養(yǎng)基還有:1640培養(yǎng)基 特殊培養(yǎng)基： 一 選擇性培養(yǎng)基 1酵母菌富集培養(yǎng)基 葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化銨0.1% 磷酸二氫鉀0.25% 磷酸氫二鈉0.05% 七水合硫酸鎂0.1% 七水合硫酸鐵0.01% 酵母膏0.05% 孟加拉紅0.003% pH4.5 2 Ashby無(wú)氮培養(yǎng)基 富集好養(yǎng)自生固氮菌 甘露醇1% 磷酸二氫鉀0.02% 七水合硫酸鎂0.02% 氯化鈉0.02% 二水合硫酸鈣0.01% 碳酸鈣0.5% 二 鑒別培養(yǎng)基 EMB培養(yǎng)基，常用于鑒別E.coli 蛋白胨 10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氫二鉀2g 伊紅Y 0.4g 美藍(lán)0.065g 蒸餾水1000g pH7.2 分離海洋微生物的培養(yǎng)基配方 2216E培養(yǎng)基配方（固體培養(yǎng)基） 蛋白胨 5克 酵母膏 1克 磷酸高鐵 0.01克 瓊脂 15-----20克 陳海水 1000毫升 煮沸氫氧化納（5%）的溶液調(diào)PH值7.6—7.8 其他培養(yǎng)基： 1.高氏一號(hào)培養(yǎng)基 KNO3:1g, NaCl:0.5g, K2HPO4:0.5g MgSO4·7H2O：0.5g FeSO4·7H2O：0.01g 可溶性淀粉20g 瓊脂20g 蒸餾水1000ml pH調(diào)至7.2~7.4，121°C滅菌30min 制法：先用少量水將淀粉調(diào)成糊狀，再取700ml水在電爐上加熱煮沸 然后邊攪拌便將淀粉糊倒入，同時(shí)保持沸騰。然后再將其他成分加入， 溶解后補(bǔ)足水分至1000ml 肉湯蛋白胨斜面： 蛋白胨10g 牛肉膏5g 蒸餾水1000ml NaCl：5g pH：7.0~7.2，121℃滅菌20min 如配制固體培養(yǎng)基需加瓊脂1.5%~2%,半固體培養(yǎng)基可加瓊脂0.5%~0.8% 不同的細(xì)胞培養(yǎng)基 天然細(xì)胞培養(yǎng)基 天然培養(yǎng)基是指來(lái)自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基，如血漿、GIBCO胎牛血清、淋巴液、雞胚浸出液等。組織培養(yǎng)技術(shù)建立早期，體外培養(yǎng)細(xì)胞都是利用天然培養(yǎng)基。但是由于天然培養(yǎng)基制作過(guò)程復(fù)雜、批間差異大，因此逐漸為合成培養(yǎng)基所替代。目前廣泛使用的天然培養(yǎng)基是GIBCO胎牛血清，另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是*。 GIBCO胎牛血清種類 目前用于組織培養(yǎng)的GIBCO胎牛血清主要是牛GIBCO胎牛血清，培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人GIBCO胎牛血清、馬GIBCO胎牛血清等。選擇用牛GIBCO胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞的原因：來(lái)源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)用考驗(yàn)人們對(duì)其有比較深入的理解。牛GIBCO胎牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的，但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物GIBCO胎牛血清更合適?！ ∨IBCO胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量zui大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，具有極為重要的功能。牛GIBCO胎牛血清分為小牛GIBCO胎牛血清、新牛GIBCO胎牛血清、胎牛GIBCO胎牛血清。胎牛GIBCO胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛GIBCO胎牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛；小牛GIBCO胎牛血清取自出生10－30天的小牛。顯然，GIBCO胎牛血清是品質(zhì)zui高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，GIBCO胎牛血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分zui少?！ IBCO胎牛血清的主要成分 GIBCO胎牛血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且GIBCO胎牛血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。GIBCO胎牛血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。 GIBCO胎牛血清主要作用 1. 提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)?！ ?. 提供激素和各種生長(zhǎng)因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等。 3. 提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用?！ ?. 提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷?！ ?. 對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶，GIBCO胎牛血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，現(xiàn)在則有目的的使用GIBCO胎牛血清來(lái)終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。GIBCO胎牛血清蛋白形成了GIBCO胎牛血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí)，粘度起到重要作用。GIBCO胎牛血清還含有一些微量元素和離子，他們?cè)诖x解毒中起重要作用，如SeO3,硒等。 GIBCO胎牛血清培養(yǎng)基主要問(wèn)題 1. GIBCO胎牛血清的成份可能有幾百種之多，目前對(duì)其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制仍不清楚，尤其是對(duì)其中一些多肽類生長(zhǎng)因子、激素和脂類等尚未充分認(rèn)識(shí)，這給研究工作帶來(lái)許多困難?！ ?. GIBCO胎牛血清都是批量生產(chǎn)，各批量之間差異很大，而且GIBCO胎牛血清保存期至多一年，因此，要保證每批GIBCO胎牛血清的相似性極為困難，從而使實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制?！ ?. 對(duì)大多數(shù)細(xì)胞，在體內(nèi)狀態(tài)，GIBCO胎牛血清不是它們接觸的生理學(xué)液體，只是在損傷愈合以及血液凝固過(guò)程中才接觸GIBCO胎牛血清，因此使用GIBCO胎牛血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài)，GIBCO胎牛血清可能促進(jìn)某些細(xì)胞的生長(zhǎng)（成纖維細(xì)胞）同時(shí)抑制另一類細(xì)胞生長(zhǎng)（表皮細(xì)胞）。 4. GIBCO胎牛血清含一些對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì)，如多胺氧化酶，能與來(lái)自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)（如精胺、亞精胺）形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體、細(xì)菌毒素等都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)，甚至造成細(xì)胞死亡?！ ?. 動(dòng)物個(gè)體不同，GIBCO胎牛血清產(chǎn)地、批號(hào)不同，每批質(zhì)量差異甚大，其成分不能保持一致?！ ?. 取材中可能帶入支原體、病毒，對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生潛在影響，可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或?qū)嶒?yàn)結(jié)果不可靠性?！ ?. 大規(guī)模生產(chǎn)中，GIBCO胎牛血清來(lái)源越來(lái)越困難，價(jià)格昂貴，是構(gòu)成動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)生產(chǎn)成本的主要部分之一。 GIBCO胎牛血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) GIBCO胎牛血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素：一是取材對(duì)象，二是取材過(guò)程。用于取材的動(dòng)物應(yīng)健康無(wú)病并且在的出生天數(shù)之內(nèi)，取材過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行，制備出的GIBCO胎牛血清要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定。WHO公布的《用動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求： 1. 牛GIBCO胎牛血清必須來(lái)自有文件證明無(wú)牛海綿狀腦病的牛群或國(guó)家。并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)系統(tǒng)?！ ?. 有些國(guó)家還要求牛GIBCO胎牛血清來(lái)自未用過(guò)反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。 3. 證明所用牛GIBCO胎牛血清中不含對(duì)所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。 4. GIBCO胎牛血清要通過(guò)濾膜過(guò)濾除菌，保證無(wú)菌?！ ?. 無(wú)細(xì)菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國(guó)家要求無(wú)細(xì)菌噬菌體污染?！ ?. 對(duì)細(xì)胞有良好的支持繁殖作用?！ ∥覈?guó)在對(duì)牛GIBCO胎牛血清的質(zhì)量2000年版《中國(guó)生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》中提出比較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求。包括蛋白質(zhì)含量，細(xì)菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細(xì)菌內(nèi)毒素，支持細(xì)胞增殖檢查。
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