上海乾思生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第16年

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細(xì)胞庫(kù)
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進(jìn)口ELISA試劑盒
自產(chǎn)ELISA試劑盒,試劑盒
人細(xì)胞,人細(xì)胞系,人細(xì)胞株
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大鼠細(xì)胞,大鼠細(xì)胞系
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人??刹《究贵w(ECHO-Ab)ELISA試劑盒

時(shí)間:2011/12/6閱讀:504
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人??刹《究贵w(ECHO-Ab)ELISA試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷
人??刹《究贵w(ECHO-Ab)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
檢測(cè)原理:試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人??刹《究乖陌晃⒖字?,依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗原,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中人??刹《究贵w(ECHO-Ab)的存在與否。
樣品收集、處理及保存方法:
1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3.細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5.保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品:
1.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
2.37℃恒溫箱
3.酶標(biāo)儀(450nm)
操作注意事項(xiàng):
1.試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3.預(yù)處理后的樣本請(qǐng)按照操作步驟用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋以達(dá)到試劑盒的的*檢測(cè)效果。
4.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5.所有液體組分使用前充分搖勻。
人??刹《究贵w(ECHO-Ab)ELISA試劑盒組成:
1.名稱96孔配置48孔配置備注
2.微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無(wú)
3.陰性對(duì)照0.5mL 0.5mL 無(wú)
4.陽(yáng)性對(duì)照0.5mL 0.5mL 無(wú)
5.檢測(cè)抗原-HRP 10mL 5mL 無(wú)
6.20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
7.樣本稀釋液6mL 3mL 無(wú)
8.底物A 6mL 3mL 無(wú)
9.底物B 6mL 3mL 無(wú)
10.終止液6mL 3mL 無(wú)
11.封板膜2 張2 張無(wú)
12.說(shuō)明書(shū)1 份1 份
13.自封袋1 個(gè)1 個(gè)無(wú)
試劑的準(zhǔn)備:20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法:
1.自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
2.手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
操作步驟:
1.從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔,陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各50μL;
3.待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
4.隨后陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min 內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
結(jié)果判斷:
1.試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00;陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15。
2.臨界值(Cut off)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
3.陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰性
4.陽(yáng)性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽(yáng)性
試劑盒性能:
1.準(zhǔn)確性:陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00;陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15,說(shuō)明試驗(yàn)結(jié)果有效。
2.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
3.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
4.貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
5.有效期:6個(gè)月

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