人環(huán)加氧酶2試劑盒

我司人環(huán)加氧酶2試劑盒細胞近3000種，來源于美國ATCC,細胞都是經(jīng)過嚴格質(zhì)量控制，在中國大陸努力搭建正牌細胞與國內(nèi)廣大科研人員之間的溝通橋梁，還有更多相關(guān)實驗產(chǎn)品，標準品，細胞株和實驗技術(shù)服務(wù)等等前期后續(xù)服務(wù)。 

　　Q1. 液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

　　要冷藏！！因為液體培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時，其溶液的pH值會發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年。

　　Q2. 液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。

　　幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求，細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時，細胞生長不良而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時，應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)細胞中心在其服務(wù)項目中配制分裝了高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養(yǎng)基中，其終濃度為2mM/ml培養(yǎng)基。包裝為粉紅色，-24?C保存。

　　Q3.細胞計數(shù)及存活測試
1、原理：
(1)計算細胞數(shù)目可用血球計數(shù)盤或是Coultercounter粒子計數(shù)器自動計數(shù)。
(2)血球計數(shù)盤一般有二個chambers，每個chamber中細刻9個1mm2大正方形，其中4個角落之正方形再細刻16個小格，深度均為0.1mm。當(dāng)chamber上方蓋上蓋玻片后，每個大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時，計數(shù)每個大正方形內(nèi)之細胞數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，再乘以104，即為每ml中之細胞數(shù)目。
(3)存活測試之步驟為dyeexclusion，利用染料會滲入死細胞中而呈色，而活細胞因細胞膜完整，染料無法滲入而不會呈色。一般使用藍色之trypan blue染料，如果細胞不易吸收trypan blue，則用紅色之Erythrosin bluish。計算細胞活率：活細胞數(shù)/(活細胞數(shù)+死細胞數(shù))×100%。計數(shù)應(yīng)在臺盼蘭染色后數(shù)分鐘內(nèi)完成，隨時間延長，部分活細胞也開始攝取染料;因為臺盼蘭對蛋白質(zhì)有很強的親和力，用不含血清的稀釋液，可以使染色計數(shù)更為準確。

　　Q4.細胞特性
在細胞培養(yǎng)之前，我們要了解一下你所要養(yǎng)細胞的基本特性，這點可以從細胞的產(chǎn)品說明書或者從ATCC細胞庫查詢。除此之外我們還要知道每管細胞的數(shù)量，建議分裂或傳代的比例，和已知細胞的傳代代次等信息。

　　Q5.準備培養(yǎng)基
復(fù)蘇細胞時需要準備合適的培養(yǎng)基，血清和細胞生長所需的添加劑。大部分培養(yǎng)細胞所用的培養(yǎng)體系，可以在訂購細胞系時獲得。
雖然大多數(shù)細胞系可以在不止一種培養(yǎng)基中生長，但是當(dāng)培養(yǎng)基改變時，細胞的性質(zhì)也會變化。因此，使用細胞庫推薦的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞會獲得的效果。

　　Q6.開啟凍存管
1.準備一個培養(yǎng)瓶，加入適宜細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基，液體體積按照說明書的推薦配置，并平衡培養(yǎng)基的溫度和pH（CO2）?！?br />2.在37℃水浴中或細胞的正常生長溫度下將凍存管輕輕搖動。解凍要快，約2分鐘或直到冰晶融化即可。
3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來消毒。進一步的操作均需在無菌操作臺中嚴格無菌條件下進行。
4.擰開凍存管的管帽并將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到一個含有9 ml推薦培養(yǎng)基的無菌離心管中。通過溫和離心（125×g 10 min）除去冷凍保護劑（DMSO）。棄去上清，并用1或2 ml*培養(yǎng)基重懸細胞。將這些細胞懸液轉(zhuǎn)移到含有*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中并輕輕搖動以*混勻。
5.培養(yǎng)24小時后檢查細胞狀態(tài)并在需要時進行傳代。

　　Q7. 培養(yǎng)用液pH對細胞生長的影響

　　由于，大多數(shù)細胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對細胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。

　　但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些，偏酸環(huán)境中更利于細胞生長。因此，我們在配制培養(yǎng)用液時，可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。