簡介
本方法使用創(chuàng)新型分體式HMR凈化管/96孔板結(jié)合96孔正壓固相萃取裝置一步式凈化血清樣品，再通過LC-MS/MS進(jìn)行檢測，回收率達(dá)90%左右。樣品處理過程簡單，結(jié)果準(zhǔn)確。
方法優(yōu)勢
Ø 蛋白沉淀和磷脂去除一步完成，可有效去除血清中蛋白、磷脂類化合物對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響
Ø 通過式凈化，極大簡化前處理步驟，約1h即可完成前處理操作
Ø 上樣量僅需50μL，大大節(jié)省了寶貴的樣品
Ø 試劑耗材使用量更少，更加環(huán)保節(jié)約
Ø 柱效遠(yuǎn)超直通式SPE，回收率穩(wěn)定，可達(dá)90％左右
配套設(shè)備及耗材
| 序號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品描述 |
| 1 | 96孔正壓固相萃取裝置 | EZ PRE-96正壓固相萃取裝置 |
| 2 | 96孔氮吹儀 | EZ VAP-96氮吹儀 |
| 3 | 雙位96孔氮吹儀 | EZ VAP-192雙位96孔氮吹儀 |
| 4 | MixMate® 混勻小精靈 | MixMate®主機(jī)，不含樣品管管架，230 V/50-60 Hz（CN） |
| 5 | 8道移液器 | 8-通道，10-100µL, 可調(diào)量程 |
| 6 | 超效分體96孔集成板HMR | HMR S-micro BIO 96 Well, 15mg, 1 mL, 1/PK |
| 7 | 超效分體96孔SPE板HMR | HMR S-micro BIO SPE, 15mg, 1 mL, 100/PK |
| 8 | 超效96孔板微徑小柱適配器 | Micro columnadapter rack，SUS,1/PK |
| 9 | 20種全氟混標(biāo)（包含方法中15種全氟） | PFAS Mixture with 20 analytes, 5 µg/mL in Methanol/Water，1mL |
| 10 | 11-氯-3-氧雜全氟十一烷磺酸鉀 | 50 µg/mL，1mL，甲醇/水，CAS：83329-89-9 |
| 11 | 13種全氟內(nèi)標(biāo) | Mass-Labelled PFC Extraction Standards Solution 2.0μg/mL 1.2mL |
| 12 | 血清中全氟質(zhì)控品Y2403 | INSPQ PFC Reference Material Y2403，1/kit |
| 13 | 血清中全氟質(zhì)控品Y2301 | INSPQ PFC Reference Material Y2301，1/kit |
| 14 | 血清中全氟質(zhì)控品Y2304 | INSPQ PFC Reference Material Y2304，1/kit |
| 15 | Leosil C18/PFP核殼柱（GB23200.121方法專用） | Leosil Shell C18/PFP, 2.7µm, 100* 2.1mm, 1/PK |
| 16 | 96孔收集板 | Collection Plate, 1 mL/Round/U-Shaped, 96 Well, 10/PK |
| 17 | 封板膜 | 660 Tape Sealing Pad for 96 Well Plate，25 Sheets/Pad，10Pad/pk |
樣品前處理
儀器條件
1）色譜條件
色譜柱：Leosil C18/PFP核殼柱 (2.7µm, 100* 2.1mm）
流動(dòng)相：5mmol/L乙酸銨甲醇（A），5mmol/L乙酸銨水溶液（B）
流速：0.4mL/min
柱溫：50℃
進(jìn)樣量：2μL
流動(dòng)相梯度表
2）質(zhì)譜條件
AB 6500+質(zhì)譜檢測器采用多反應(yīng)檢測模式（Multiple
Reaction Monitoring，MRM），ESI負(fù)離子模式。
離子源：電噴霧離子源；
掃描方式：負(fù)離子掃描；
檢測方式：多反應(yīng)離子監(jiān)測（MRM）；
電噴霧電壓：-4500V；
離子源溫度：400℃；
輔助氣1：60psi；
輔助氣2：60psi；
氣簾氣：30psi；
碰撞氣體：Medium
目標(biāo)PFASs的離子對、錐孔電壓、碰撞能量等參數(shù)見下表
方法定量限
在以下兩種方法中取最大值作為本項(xiàng)目的方法定量限（Limit of quantification，LOQ）：（1）在實(shí)際血清基質(zhì)中滿足信噪比大于10的最低濃度，信噪比采用RMS（Root Mean Square，RMS）方法；（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線工作范圍內(nèi)滿足實(shí)測濃度在理論值偏差±20％之內(nèi)的最低濃度。由于本研究中樣品未經(jīng)濃縮和稀釋，無稀釋倍數(shù)，因此方法定量限即為LOQ，如下表。
16種PFASs的定量限
回收率和精密度
血清中16種全氟化合物不同水平加標(biāo)回收率和精密度（n=6）
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1、內(nèi)標(biāo)體積太?。?/span>50、20微升），稍微有損失，就會影響定量，所以建議先加樣品、再加內(nèi)標(biāo)，最后加乙腈；
2、加液體過程中，一定注意盡量讓移液槍的槍頭接近凈化管中最上層篩板加液。需要正確使用移液槍，特別是小體積加樣時(shí)；
3、建議分兩次加入乙腈。如果只加一次乙腈，可能洗脫不完全，凈化管里有殘留。壓完一次，加入乙腈，再正壓；
4、乙腈：血清的比例從3：1開始優(yōu)化；
5、其他項(xiàng)目根據(jù)化合物的性質(zhì)選擇甲醇或乙腈作為提取溶劑。
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