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液相色譜特點(diǎn)及對流動相的要求
閱讀：1913發(fā)布時(shí)間：2015-10-8
液相色譜法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有柱效，但會引起阻力，需用壓輸送流動相，故又稱壓液相色譜法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而稱為速液相色譜法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也稱現(xiàn)代液相色譜。
HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下點(diǎn)：
速度快——通常分析一個(gè)樣品在15~30 min，有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。
分辨率——可選擇固定相和流動相以達(dá)到*分離效果。
靈敏度——紫外檢測器可達(dá)0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測器可達(dá)0.1pg。
柱子可反復(fù)使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。
樣品量少，容易回收——樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。
HPLC對流動相的基本要求是：
①與固定相不互溶，不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。
②對樣品有適宜的溶解度，要求k值在1～10范圍內(nèi)（可用范圍）或2～5（*范圍）。溶解度太大，k值太小，不利于分離；溶解度太小，k值太大，可能使樣品在流動相中產(chǎn)生沉淀。
③必須與檢測器相適應(yīng)。例如用紫外檢測器，流動相本身在檢測波長處應(yīng)無吸收。
④流動相的粘度要小，可以降低色譜柱的阻力而提柱效。
⑤純度，不含機(jī)械雜質(zhì)。
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