成年小鼠的灌流實(shí)驗(yàn)

進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌流是獲得良好的形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果以及保存腦、腎、心臟和其他許多器官所必需的。對(duì)于未經(jīng)訓(xùn)練的實(shí)驗(yàn)人員，初次進(jìn)行灌流可能會(huì)失敗，故建議首先用一些對(duì)照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物練習(xí)，以熟悉此過程。

基本方案

實(shí)驗(yàn)材料       

小鼠

試劑、試劑盒       

PBS

儀器、耗材     

23-G針頭注射管解剖器械

實(shí)驗(yàn)步驟       

1.  一支針管吸滿1×PBS，另一支吸4%PFA固定液（4℃），擱置待用。

2.  在袋中用CO2氣體處死小鼠。停止吸呼后，立刻背朝下放平小鼠，小心剖開胸腔防止過多出血，小心并迅速切開肋骨，剪去橫隔膜，暴露心臟。

3.  小心將吸有1×PBS的針管刺入左心室，剖開右心室排液。緩慢但持續(xù)將1×PBS灌入心臟（見圖一、如灌流正常，血液豐富器官，如肝臟，脾臟和腎臟將轉(zhuǎn)呈灰白色）。

4.  當(dāng)多數(shù)血液已流出后，撥去1×PBS的針管將吸有4%PFA固定液的針管插入左心室同一進(jìn)針處，以20 ml 固定液緩慢灌流小鼠。

5.  灌流后，剖下器官或組織，放入盛有4%PFA固定液的做好標(biāo)記玻璃瓶中，于冰上保存。