人胰腺癌裸小鼠模型

人胰腺癌裸小鼠模型

實(shí)驗(yàn)方法原理

          將人胰腺癌細(xì)胞株8988 接種于裸鼠腋窩處皮下，每周測(cè)量腫瘤大小，第42d 處死小鼠。腫瘤組織及相關(guān)臟器送病理及電鏡檢查，放射免疫法檢測(cè)相關(guān)抗原。皮下腫瘤組織細(xì)胞及細(xì)胞株培養(yǎng)，HE 染色。

實(shí)驗(yàn)材料         

裸小鼠BALB c nu-nu胰腺癌細(xì)胞株8988

試劑、試劑盒

RPMI-1640 *培養(yǎng)基胰酶戊二醛

儀器、耗材    

CO2 培養(yǎng)箱試管

實(shí)驗(yàn)步驟         

一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備

裸小鼠BALB/ c nu- nu ，4～6 周齡，體重16～20 g，雌雄兼?zhèn)洌?/span>SPF 級(jí)環(huán)境中飼養(yǎng)，恒溫25～27 ℃，恒濕45%～50% ，飲用水及食物均經(jīng)滅菌。

二、人胰腺癌細(xì)胞株8988 體外傳代培養(yǎng)

1.  將人胰腺癌細(xì)胞株放入含10 %的RPMI-1640 *培養(yǎng)基中，置于37 ℃、5 %CO2 培養(yǎng)箱中，每2d 換液1次，2～3d，0. 25 %的胰酶消化，一傳3 傳代培養(yǎng)。

2.  待細(xì)胞布滿瓶底時(shí),收集單細(xì)胞懸液，每只5 ×106 腫瘤細(xì)胞，0. 2ml ，注射于裸小鼠腋窩處皮下，建立腫瘤模型。

3.  每周用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤大小，按公式V= π/ 6 ×長(zhǎng)×寬×高，計(jì)算腫瘤大小，并繪制生長(zhǎng)曲線。

三、血清學(xué)檢測(cè)

第6 周時(shí)拔眼球法處死小鼠，收集血液于試管中，靜置取血清，檢測(cè)腫瘤相關(guān)抗原及淀粉酶。

四、巨檢

1.  處死裸鼠后，皮下剝離腫瘤，記錄質(zhì)地、浸潤(rùn)、血供情況，觀察有無(wú)腹腔粘連，各臟器轉(zhuǎn)移狀況。

2.  將腫瘤組織、肺、肝、脾、腸系膜、十二指腸、胃、腦等取標(biāo)本置于10 %的福爾馬林固定液中待用。

五、病理學(xué)檢測(cè)

上述標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋切片，HE 染色，光鏡觀察。

六、超微結(jié)構(gòu)觀察

腫瘤組織2. 5 %戊二醛，1 %鋨酸雙固定，包埋，超薄切片，鈾鉛雙重染色，透射電鏡觀察。

七、鏡檢

1.   腫瘤組織細(xì)胞培養(yǎng)及活細(xì)胞觀察：取新鮮裸鼠皮下腫瘤組織，PBS 漂洗3 次，剪成1 m3 大小，0. 25 %的胰酶消化，去除粗大組織后，制成單細(xì)胞懸液，置37 ℃、5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)、生長(zhǎng)情況等， 并與細(xì)胞株8988 進(jìn)行比較。

2.  細(xì)胞HE 染色及形態(tài)學(xué)觀察：腫瘤細(xì)胞及細(xì)胞株相同量培養(yǎng)于含有蓋玻片的六孔板中， 生長(zhǎng)至次融合后，棄培養(yǎng)基，PBS 洗3 次，2. 5 %戊二醛固定，PBS 洗3 次，HE 染色，光鏡下觀察比較。