脾單核細(xì)胞分離實驗 返回列表頁

脾單核細(xì)胞分離實驗操作方法：

采用頸椎脫臼法處死小鼠，于75%的酒精中浸泡10-15min；
在無菌超凈臺內(nèi)分離脾臟，放入PBS溶液（按照1：50的比例加入雙抗）中清洗2遍；
將清洗后的脾臟組織轉(zhuǎn)移至離心管中，加入適量的RMPI-1640培養(yǎng)基，用剪刀將其剪碎成糜狀；
將剪碎后的組織經(jīng)200目的濾網(wǎng)過濾，得到脾細(xì)胞懸液；
另取一個離心管，先加入與細(xì)胞懸液等量體積的淋巴細(xì)胞分離液，之后將細(xì)胞懸液輕輕加到離心管的淋巴細(xì)胞分離液上層（注意45度傾斜沿管壁滴加，一定要緩慢否則懸液沉下去導(dǎo)致分層界面不明顯）；
3000rpm離心10min，離心完畢后吸取中間白膜層即為脾單個核細(xì)胞；
3000rpm離心10min，加入RMPI-1640培養(yǎng)基進(jìn)行洗滌一次；
用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞；3000rpm離心10min，再次用RMPI-1640培養(yǎng)基進(jìn)行洗滌一次；
洗滌結(jié)束后，所得細(xì)胞沉淀用RMPI-1640培養(yǎng)基重懸后進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。