原代細胞分離純化 返回列表頁

單個細胞分離培養(yǎng)技術（細胞克隆技術），即從細胞群體中分離出一個細胞，并使其在體外培養(yǎng)體系中能繁殖成新的細胞群體，這種由單個細胞所形成的細胞群（或集落）稱為一個克隆，這種純化后的細胞群體稱為細胞株。有以下5種常采用的方法：毛細管克隆法、有限稀釋克隆法、平皿克隆分離法、軟瓊脂克隆分離法、單細胞顯微克隆法。

細胞的純化

細胞的純化分為自然純化和人工純化，主要采用以下5種方法：

1．細胞因子依賴純化法：加入某些特殊的細胞因子從而使細胞達到純化，但是此方法有依賴性，加入之后每次培養(yǎng)細胞都需要因子培養(yǎng)。

2．酶消化法：利用上皮細胞和成纖維細胞對胰蛋白酶的耐受性不同，達到純化的目的。此方法也可對貼壁細胞與半貼壁及粘附細胞間的分離純化。

（1）上皮細胞與成纖維細胞的分離純化

需要在胰蛋白酶的作用下，讓成纖維細胞先脫壁，從而得到上皮細胞。

（2）骨髓基質肌樣細胞的純化

同樣適用酶消化法使粘附細胞脫壁分離，讓骨髓基質細胞或血液中肌樣細胞與淋巴細胞分開和純化。

3．反復貼壁法

成纖維細胞其貼壁過程快，能在短時間內完成附著過程，而上皮細胞在短時間內不能附著或附著不穩(wěn)定，稍加振蕩即浮起，利用此差別可以純化細胞。

4．電烙篩選法

貼壁細胞在轉化時，細胞層中會出現分散的轉化灶，細胞密集、排列規(guī)則，有明顯生長趨勢，與周邊未能轉化的細胞有明顯的區(qū)域界限，可用機械刮除法去除或用電烙篩選法燙死未轉化細胞而保留轉化灶細胞。

5．機械刮除法

此方法去除不需要的細胞區(qū)域而保留需要的細胞區(qū)域，適用于上皮細胞和成纖維細胞分離純化。