RT-PCR實(shí)驗(yàn) 返回列表頁(yè)

RT—PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）是將RNA的反轉(zhuǎn)錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增（PCR）相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用，從RNA合成cDNA，再以cDNA為模板，在DNA聚合酶作用下擴(kuò)增合成目的片段。RT—PCR技術(shù)靈敏而且用途廣泛，可用于檢測(cè)細(xì)胞中基因表達(dá)水平、細(xì)胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉(zhuǎn)錄的RNA產(chǎn)物。無(wú)論使用何種RNA，關(guān)鍵是確保RNA中無(wú)RNA酶和基因組DNA的污染。用于反轉(zhuǎn)錄的引物可視實(shí)驗(yàn)的具體情況選擇隨機(jī)引物、Oligo dT及基因特異性引物中的一種。對(duì)于短的不具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的真核細(xì)胞mRNA，3種都可。