動物哮喘模型 返回列表頁

BALB/c小鼠于第0天和第14天分別腹腔注射0.1mL/只OVA液(0.2 mg/mL)和DBP溶液（0.5 mg/kg），第21~23天連續(xù)3天以0.5%的OVA溶液霧化激發(fā)，每天于上午下午固定時間霧化2次，每次20min。霧化過程中觀察小鼠一般行為變化，后一次霧化結(jié)束后24小時，小鼠摘眼球取血，取支氣管肺泡灌洗液( Bronchial Alveolar Lavage, BALF )及肺組織。
一般行為學(xué)觀察  觀察小鼠在霧化過程中是否出現(xiàn)撓臉、毛發(fā)豎立、呼吸急促、煩躁不安、大小便失禁等現(xiàn)象。
血中Eos計數(shù)    后一次霧化激發(fā)結(jié)束24h后，小鼠摘眼球取血，獲得血液后立即取出20 μl與380μl 嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液混勻，利用細(xì)胞計數(shù)板于光學(xué) 顯微鏡下進(jìn)行Eos計數(shù)。
血清中IgE測定   將獲得的血液靜置2h后，離心，3500 rpm，15min，取血清，按IgE ELISA試劑盒說明書進(jìn)行測定，并通過樣本總蛋白含量進(jìn)行結(jié)果校正。
BALF細(xì)胞分類計數(shù)  將小鼠仰臥位固定，打開胸腔后，結(jié)扎右肺及左側(cè)肺上葉。分離并暴露氣管，用適宜針頭進(jìn)行氣管插管，以預(yù)冷PBS反復(fù)灌洗肺組織（0.5 mL/次，共兩次），收集BALF，低溫離心( 3500 rpm，10min )，取上清，保存于-20℃待測。細(xì)胞沉淀用0.2 mL預(yù)冷PBS重懸，吹打均勻后取10 μl于細(xì)胞計數(shù)板上在光學(xué)顯微鏡下計細(xì)胞總數(shù)，剩余細(xì)胞懸液涂片，用快速瑞姬氏染液染色，顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞分類計數(shù)。
BALF中IL-4、IL-5、IL-9、IL-13、IFN-γ的測定  將獲得的BALF上清根據(jù)相關(guān)細(xì)胞因子檢測試劑盒的說明書進(jìn)行各指標(biāo)定量檢測，測定結(jié)果經(jīng)總蛋白含量校正。
肺組織中IL-4和IFN-γ的測定  將右側(cè)肺組織用預(yù)冷的PBS研磨得15 % 組織勻漿，低溫離心，3500 rpm，15min，取上清按照 ELISA 測定試劑盒的操作步驟進(jìn)行IL-4和IFN-γ測定，并通過樣本總蛋白定量來進(jìn)行校正。
肺組織HE及PAS染色  剪取左肺上葉，置10%中性福爾馬林中固定，石蠟包埋，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE及PAS染色，鏡下觀察肺組織炎性細(xì)胞浸潤及黏性蛋白增生情況。