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質粒轉染實驗
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貨物所在地:上海上海市

更新時間:2024-11-11 08:30:46

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質粒轉染實驗:轉染(transfection)是真核細胞主動或被動導入外源DNA的片段而獲得新的表型的過程。


常規(guī)轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩(wěn)定轉染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達,但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時內(依賴于各種不同的構建)分析結果,常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩(wěn)定轉染,外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記,如來氨丙基轉移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸轉移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復篩選,得到穩(wěn)定轉染的同源細胞系。
轉染技術的選擇對轉染結果影響也很大,許多轉染方法需要優(yōu)化DNA與轉染試劑比例,細胞數(shù)量,培養(yǎng)及檢測時間等。
 

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