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大鼠缺血/再灌注動物模型建立的方法如下:
實驗動物 SD雄性大鼠,體重250~300g,清潔級。
分籠飼養(yǎng)(室溫20~23℃,濕度60%~70%),明暗光照12h:12h,適應(yīng)性飼養(yǎng)1~2d,并按實驗動物使用的3R原則給予人道關(guān)懷。術(shù)前12h禁食,自由飲水。
腔內(nèi)注射麻醉(10ml/kg),注射器針頭從腹部向頭方向刺入腹腔,回抽針芯阻力較大、無回血、無胃腸道內(nèi)容物時,緩慢推注。約10min后大鼠逐漸癱軟,反應(yīng)淡漠,用手牽拉鼠尾無明顯反抗時置仰臥位,固定上頜中切牙和四肢。實驗過程中維持大鼠肛溫在37℃左右,直到恢復(fù)活動。
手術(shù)按外科無菌原則操作。①備皮,碘伏消毒皮膚。②于正中線旁開約5mm處,行頸部右側(cè)縱行切口,剪開淺筋膜,暴露右側(cè)胸鎖乳突肌,在胸鎖乳突肌與頸前肌群之間向深部鈍性分離,玻璃分針游離頸總動脈(CCA)和迷走神經(jīng),直至 CCA分叉處。鈍性分離向內(nèi)行走的頸外動脈(ECA)及向外后行走的頸內(nèi)動脈(ICA)。③分別在CCA、ECA、ICA下方穿線,結(jié)扎CCA近心端、頸外動脈近分叉部。④在CCA上距其末端約5.0mm處剪一小口,將線栓沿ICA方向連續(xù)輕柔推進,插入(18.0±0.5)mm時遇到輕微阻力即止,然后于ICA近心端結(jié)扎該動脈,全層縫合切口,并留置長約3cm的尼龍線于體外,碘伏消毒手術(shù)區(qū)。缺血1h后拔出阻塞線約10min實現(xiàn)再灌注。假手術(shù)組(Sham組):插線深度小于10mm,其余處理不變。
動物醒后約1h,即出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損情況,并借此判定手術(shù)成功性。TTC染色可檢測手術(shù)成功的動物出現(xiàn)腦梗死灶。常規(guī)組織切片染色可見腦缺血區(qū)神經(jīng)元、膠質(zhì)細胞、血管及神經(jīng)氈等損傷,以及星形膠質(zhì)細胞增生、活化,炎細胞浸潤等病理變化。
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