液相色譜柱的使用方法:
液相色譜柱在使用前,進行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要留意: 液相色譜柱柱性能可能由于所使用的樣品、活動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是*條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。
1、樣品的前處理:
a、使用活動相溶解樣品。
b、使用予處理柱除往樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c、使用0.45μm的過濾膜過濾除往微粒雜質(zhì)。
2、活動相的配制:
液相色譜是樣品組分在柱填料與活動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,因此要求活動相具備以下的特點:
a、活動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保存在柱中)。
b、活動相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學反應(特殊情況除外)。
c、活動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運用進步溫度的方法降低活動相的黏度)。
d、活動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e、活動相沸點不要太低,否則輕易產(chǎn)生氣泡,導致實驗無法進行。
f、在活動相配制好后,一定要進行脫氣。除往溶解在活動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止活動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、活動相流速的選擇:
因柱效是柱中活動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求*柱效,使用*流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
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