DH5α感受態(tài)細(xì)胞操作方法及特點

DH5α感受態(tài)細(xì)胞

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）

1. 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化，以下實驗以 100μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。
2. 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的 DNA，注意目的 DNA 的體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，冰浴放置 30 分鐘。
3. 將離心管置于 42℃水浴中熱擊60-90秒，然后快速轉(zhuǎn)移到冰浴中放置 2-3 分鐘，注意不要搖動離心管。
4. 向離心管中加入 900μl 無菌無抗的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基，37℃ 180 rpm 振蕩培養(yǎng) 30分鐘到1小時。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
5. 取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培養(yǎng) 12-16小時或隔夜培養(yǎng)。涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整，如轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取200μl 左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板；反之，如轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少，可4℃，2500g離心5min后，棄去上清約700μl，用剩余約200-300μl 的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板。過多菌液可以抑制細(xì)菌生長。

DH5α感受態(tài)細(xì)胞特 點:  一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的產(chǎn)物可與 pUC 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn) β 互補，可用于藍(lán)白斑篩選。

注：內(nèi)容供參考，具體產(chǎn)品信息請來電或在線咨詢。