如何用牛津杯做微生物抑菌試驗(yàn)藥敏實(shí)驗(yàn)

      抑菌試驗(yàn)/藥敏實(shí)驗(yàn)方法主要有兩種，即擴(kuò)散法和稀釋法。其中擴(kuò)散法屬手工測(cè)試方法，通過測(cè)試藥物紙片或者牛津杯在固體培養(yǎng)基上的抑菌圈的大小，判斷細(xì)菌對(duì)該種藥物是否敏感。
稀釋法包括試管稀釋法和微量稀釋法，通過測(cè)試細(xì)菌在含不同濃度藥物培養(yǎng)基內(nèi)的生長情況，判斷其zui低抑菌濃度（MIC）。 
      由于擴(kuò)散法操作簡單，成本低，已經(jīng)被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室和基層單位所采用。擴(kuò)散法又包括紙片法、牛津杯法和打孔法。 
一、實(shí)驗(yàn)原理
1、將培養(yǎng)基平板置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，一方面試驗(yàn)菌（指示菌）開始生長繁殖；另一方面抗生素呈球面擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度，離杯越近，抗生素濃度越大，離杯越遠(yuǎn)抗生素濃度越小。
2、在牛津杯周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細(xì)菌的生長被抑制，形成透明的抑菌圈。
3、抑菌圈的大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度（藥敏實(shí)驗(yàn)）或藥物對(duì)指示細(xì)菌的抑菌程度（抑菌試驗(yàn)）。
4、抗生素濃度越高，抑菌圈越大。
5、在抑菌圈的邊緣處，瓊脂培養(yǎng)基中所含抑菌物質(zhì)的濃度即為該菌懸液中對(duì)該種指示菌的zui低抑菌濃度（MIC） 。
6、抑菌圈直徑與藥物對(duì)測(cè)試菌的zui低抑菌濃度 呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
二、實(shí)驗(yàn)材料
培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基
菌種：大腸桿菌（E.coli)、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)
藥品：阿莫西林、黃芪多糖、
其他：牛津杯、培養(yǎng)皿、酒精棉、酒精燈、涂布器、移液槍、1mL、200uL槍頭、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、接種環(huán)
“牛津杯”可從北京吉泰遠(yuǎn)成科技有限公司采購，牛津杯是內(nèi)徑為6mm，外徑為7.8mm，高10mm的圓筒形管子，管子的重量盡可能相等。 
三、實(shí)驗(yàn)操作
1. 倒平板：將已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基加熱到*融化，倒在培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿約20ml，凝固。
2. 標(biāo)記：菌種、牛津杯擺放位置、藥物及其 濃度
3. 制備菌懸液：用生理鹽水洗下試管內(nèi)的菌苔并稀釋。
4. 菌液涂布：吸取1mL 菌液入平板表面，用涂布器涂布將菌液涂布均勻
5. 擺放牛津杯：在培養(yǎng)基表面垂直擺放牛津杯，輕輕加壓，使其與培養(yǎng)基接觸無空隙。