如何看懂質(zhì)粒圖譜和質(zhì)粒上各個元件

如何看懂質(zhì)粒圖譜和質(zhì)粒上各個元件具體作用是什么。

看載體圖譜大部分可以根據(jù)以下幾步來理解：

*步：首先看Ori的位置，了解載體的類型（原核/真核/穿梭載體）Ori的箭頭指復(fù)制方向，其他元件標注的箭頭多指轉(zhuǎn)錄方向（正向）。

所謂穿梭載體是指一類人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點和選擇標記，因而可以在兩種不同類群宿主中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。此概念不僅用于不同的微生物菌群之間，也可以推廣到真核生物表達載體的構(gòu)建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳動物表達載體pMT2 和用于植物細胞的Ti 質(zhì)粒。這些穿梭載體不僅可以在大腸桿菌中復(fù)制擴增，也可以在相應(yīng)的枯草、酵母、動物或植物細胞中擴增和表達。這樣利于對質(zhì)粒的分子生物學(xué)操作和大量制備。

第二步：再看篩選標記，如抗性，決定使用什么篩選標記。

（1）Ampr 水解β－內(nèi)酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性。
（2）tetr 可以阻止四環(huán)素進入細胞。
（3）camr 生成氯霉素羥乙酰基衍生物，使之失去毒性。
（4）neor（kanr） 氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶 使G418（長那霉素衍生物）失活
（5）hygr 使潮霉素β失活。

第三步：看多克隆位點（MCS）。
它具有多個限制酶的單一切點。便于外源基因的插入。如果在這些位點外有外源基因的插入，會導(dǎo)致某種標志基因的失活，而便于篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。

第四步：再看外源DNA插入片段大小。
一般來說，外源DNA的片段越長，越難插入，越不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)化效率越低。

第五步：是否含有表達系統(tǒng)元件，即啟動子－核糖體結(jié)合位點－克隆位點－轉(zhuǎn)錄終止信號。這是用來區(qū)別克隆載體與表達載體?？寺≥d體中加入一些與表達調(diào)控有關(guān)的元件即成為表達載體。選用哪種載體，還是要以實驗?zāi)康臑闇省?br />要把一個有用的目的基因通過基因工程手段送到生物細胞（受體細胞），需要運載工具攜帶外源基因進入受體細胞，這種運載工具就叫做載體。載體有克隆載體，看懂質(zhì)粒圖譜是將目的基因裝入載體前必須要做的功課，只有看懂質(zhì)粒圖譜才知道如何將目的基因裝入載體及所要用的載體的大致用途。

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