溴化乙錠

        溴化乙錠用于觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA，溴化乙錠是屬于高度靈敏的熒光染色劑，溴化乙錠用標(biāo)準(zhǔn)302nm 紫外光透射儀激發(fā)
并放射出橙紅色信號(hào)，觀察瓊脂糖凝膠中DNAzui常用的方法是利用熒光染料進(jìn)行染色，含有一個(gè)可以嵌入DNA堆積堿基之間的
一個(gè)三環(huán)平面基團(tuán)。它與DNA的結(jié)合幾乎沒有堿基序列特異性。在高離子強(qiáng)度的飽和溶液中，大約每2.5個(gè)堿基插入一個(gè)分子。當(dāng)染料
分子插入后，其平面基團(tuán)與螺旋的軸線垂直并通過范德華力與上下堿基相互作用。這個(gè)基團(tuán)的固定位置及其與堿基的密切接近，導(dǎo)致與DNA結(jié)
合的染料呈現(xiàn)熒光，其熒光產(chǎn)率比游離溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm處的紫外輻射并傳遞給染料，而被結(jié)合的染料本身吸收302nm和
366nm的光輻射。這兩種情況下，被吸收的能量在可見光譜紅橙區(qū)的590nm處重新發(fā)射出來。由于-DNA復(fù)合物的熒光產(chǎn)率比沒有結(jié)合
DNA的染料高出20-30倍，所以當(dāng)凝膠中含有游離的（0.5ug/ml）時(shí)，可以檢測(cè)到少至10ng的NDA條帶。可以嵌入堿基分子中
，導(dǎo)致錯(cuò)配。是強(qiáng)誘變劑，具有高致癌性！會(huì)在60－70度是蒸發(fā)，所以不要在膠太熱的時(shí)候加，或者應(yīng)該加到液體里，0.5ug/ml，染色半小時(shí)，當(dāng)加得過多時(shí)，也可以在室溫用水將已染色的凝膠浸泡20min以降低未結(jié)合的引起的背景熒光。由于具有一定的毒性，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)對(duì)含的溶液進(jìn)行凈化處理再行棄置，以避免污染環(huán)境和危害人體健康。
1、對(duì)于含量大于0.5mg/ml的溶液，可作出如下處理：
a將EB溶液用水稀釋至濃度低于0.5mg/ml；
b加入一倍體積的0.5mol/L KMnO4，混勻，再加入等量的25mol/L HCl，混勻，置室溫?cái)?shù)小時(shí)；
c加入一倍體積的2.5mol/L NaOH，混勻并廢棄。
2、EB含量小于0.5mg/ml的溶液可作如下處理：
a按1mg/ml的量加入活性炭，不時(shí)輕搖混勻，室溫放置1小時(shí)；
b用濾紙過濾并將活性碳與濾紙密封后丟掉。