基因組DNA抽提

來(lái)源：上海銳谷生物科技有限公司 2010年12月09日 15:55

. 基因組DNA降解

（1）樣品不新鮮：雖然DNA在分子結(jié)構(gòu)上較RNA穩(wěn)定，但樣品在分離后細(xì)胞內(nèi)的DNA酶同樣會(huì)作用于DNA分子。

（2）樣品本身富含DNA酶；

2. 得率低或無(wú)基因組DNA

（1）DNA未充分釋放：在分離到的相間沉淀中加Buffer G-A后未充分振蕩釋放DNA。

（2）Buffer W2中未加入無(wú)水乙醇：未加乙醇的Buffer W2是一種低鹽溶液，可溶解DNA。若直接用于洗滌DNA-prep Tube將會(huì)溶解并去除結(jié)合在silica膜上的DNA。

（3）DNA未充分洗脫：用于洗脫DNA的Eluent或去離子水應(yīng)在使用前預(yù)熱至65℃，其體積不應(yīng)小于60 μl。

3. RNA污染

在Buffer R-C分相后分離相間沉淀的時(shí)，未將下相（含RNA）*去除。

4. 生物學(xué)活性差

（1）DNA中鹽分含量高：Buffer W1含高濃度鹽離子，后續(xù)的Buffer W2洗滌是為去除鹽分設(shè)計(jì)的。操作時(shí)按說(shuō)明書(shū)的參數(shù)用Buffer W2洗滌DNA-prep Tube。

（2）DNA中含乙醇：使用前用戶(hù)已在Buffer W2中加入乙醇，若洗滌時(shí)不嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)提供的實(shí)驗(yàn)參數(shù)進(jìn)行操作可能會(huì)有乙醇?xì)埩粼趕ilica膜上。

出現(xiàn)問(wèn)題的原因分析及解決方法

可能出現(xiàn)的問(wèn)題	可能原因	建議
結(jié)合柱阻塞	殘留細(xì)胞碎片	沉淀之后，確保無(wú)原材料顆粒一起被轉(zhuǎn)移。
	在把試樣轉(zhuǎn)移至結(jié)合柱上時(shí)，DNA團(tuán)還沒(méi)有*溶解	在加入乙醇之前，確保DNA已經(jīng)*溶解。這可能需要再次在65℃下水浴及旋渦振蕩。
	樣品太黏滯	起始原料的量不要超過(guò)建議量,或者增加試劑量,并且每個(gè)樣品用2個(gè)個(gè)或以上的結(jié)合柱。
	沉淀不*	沉淀后，增加離心的轉(zhuǎn)速或時(shí)間。
低DNA量	原材料沒(méi)有充分研碎	無(wú)論是干的樣品還是新鮮樣品，在加入Buffer P1之前，均要把它們制成均勻的粉粒。
	組織細(xì)胞溶解不好	減少原材料的量，或增加試劑的量。
	DNA仍然結(jié)合在結(jié)合柱上	把洗脫液的體積增加到200μl，并在離心之前把整個(gè)包著柱的離心管在65℃下水浴5min。
	DNA被洗掉了	在洗滌之前，加入適當(dāng)體積的無(wú)水乙醇以沖稀Wash Buffer的濃度。
以后的應(yīng)用中出現(xiàn)的問(wèn)題	殘留鹽	Wash Buffer必須在室溫下保存。
以后的應(yīng)用中出現(xiàn)的問(wèn)題	殘留乙醇	在第二次離心洗滌后，確保結(jié)合柱在極速離心2min的情況下已經(jīng)干了。

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