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??礜ASBA技術(shù)平臺-禽流感病毒檢測

來源:??瞪萍加邢薰?nbsp;  2017年03月14日 09:46  

NASBA(Nucleic acid sequence-based amplification)技術(shù)是一項以RNA 為模板的快速等溫擴增技術(shù),這項技術(shù)特別適用于RNA 分子的檢測。其特點是整個擴增過程在恒溫條件下進行,因此不需要特殊(如PCR 儀)的控溫裝置,大大避免了PCR 擴增過程中復雜的溫度變化。

 

于常海教授借助NASBA技術(shù)平臺,開發(fā)了世界上*個成熟而廣泛適用的禽流感早期快速診斷系統(tǒng)此系統(tǒng),包括對禽流感各亞型包括高致病性病毒的特異性檢測,為世界上多個國家地區(qū)用于禽流感的早期常規(guī)篩查和疫情防控, 推動了國內(nèi)外禽流感疫情監(jiān)控的發(fā)展。

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該技術(shù)平臺技術(shù)以NASBA病毒檢測系統(tǒng)為中心,在確保高靈敏度、高準確率的前提下,使檢測周期縮短至半天;且無需特殊的昂貴儀器,檢測人員無需特殊技能;它是一個速度快、成本低并且實現(xiàn)了全自動檢測的診斷系統(tǒng),更重要的是此靈敏的設(shè)備適用于資源有限的高感染區(qū),如:條件落后的基層偏遠地區(qū)。這些地區(qū)也往往是疫情爆發(fā)的zui前沿。該技術(shù)的應(yīng)用顯著減少了大面積篩查時的工作量和成本。

由于該技術(shù)是恒溫擴增,加上標準化的操作步驟,使不同實驗室所得實驗結(jié)果具有很高的可比性。

于常海開發(fā)的NASBA技術(shù)平臺的*性包括:

NASBA 不會受到抗體存在的影響,能夠區(qū)分接種疫苗的生物體中目的病毒存在與否 。

NASBA 在禽流感檢測中能夠區(qū)分致病菌株和非致病菌株

對禽流感H5N1病毒的檢測,已經(jīng)充分的證明:NASBA的靈敏度可以與病毒檢測“金標準”——病毒分離法相媲美。

 

與NASBA相比, 病毒培養(yǎng)方法操作繁瑣、實驗時間長,操作嚴格。即使熟練的技術(shù)人員至少需要14天的時間完成整個過程。

使用NASBA技術(shù),在zui適實驗條件下1.5小時能夠擴增1012倍,遠遠高于PCR的109倍的擴增效果。

 

 

于常海教授研發(fā)團隊迄今已成功開發(fā)出可檢測禽流感群特異性( H1-H15 )(NASBA-AIV)、H5 亞型(NASBA-H5)、H7 亞型(NASBA-H7)的NASBA/ECL 檢測試劑盒。

NASBA 技術(shù)操作簡便,自動化水平高,可以減少人為造成的誤差。而且還是一種高通量方法,可以同時檢測50 個樣本,非常適用于大規(guī)模樣品的篩查,節(jié)省基層使用時的檢測成本。NASBA 技術(shù)的擴增產(chǎn)物為RNA 分子,使用者可以根據(jù)需要選擇不同的檢測方法,如電化學發(fā)光法和酶聯(lián)法等。而且,與PCR 的產(chǎn)物DNA 分子不同,RNA 分子不易對實驗儀器和環(huán)境造成污染,避免了產(chǎn)物交叉污染實驗儀器、操作環(huán)境導致的假陽性結(jié)果。適用于NASBA 技術(shù)的樣品范圍很廣,除動物組織,血液、體液樣本外,還可對環(huán)境樣本進行監(jiān)測,如禽類飼養(yǎng)場所、交易場所、運輸工具等等,因此為監(jiān)測和控制禽流感的傳播提 供了有效的依據(jù)和手段。

基于NASBA技術(shù)檢測平臺的禽流感診斷產(chǎn)品為世界*廣泛使用的禽流感早期快速診斷系統(tǒng),被列為中國禽流感檢測的國家標準、世界動物衛(wèi)生組織禽流感檢測推薦方法。該產(chǎn)品通過世界糧農(nóng)組織和世界動物衛(wèi)生組織參考實驗室評估驗證,為*在日本政府農(nóng)林水產(chǎn)省成功注冊的中國疫病檢測產(chǎn)品,也是日本僅有的禽流感檢測注冊產(chǎn)品。該成果在《自然-生物科技》、《柳葉刀》、《病毒學雜志》等刊物上發(fā)表12篇SCI論文,獲33項,已應(yīng)用于檢測SARS、口蹄疫、新城疫、豬瘟等病毒。

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