離心機(jī)在血型選取上的應(yīng)用

輸血時(shí)如血型不合會(huì)造成患者出現(xiàn)輸血的不良反應(yīng)，因此使用相符的血型是輸血安全的前提保證。而作為人類(lèi)的重要遺傳標(biāo)志-血型，在近年科學(xué)的發(fā)展下，人們逐步探索分析，已發(fā)現(xiàn)300余種現(xiàn)人類(lèi)紅細(xì)胞血型抗原。當(dāng)今，世界多國(guó)正努力建立稀有血型細(xì)胞血庫(kù)，當(dāng)中對(duì)所發(fā)現(xiàn)的稀有血型，如Rh、MNSs、P、Kell、Kidd、Lutheran等，建立起稀有血型系統(tǒng)，以保證為稀有血型的患者更加快速及時(shí)地提供合適紅細(xì)胞。

中國(guó)稀有血型篩選與建庫(kù)

在我們的臨床研究中，對(duì)于稀有血型的篩選工作和具體項(xiàng)目中，對(duì)于引發(fā)臨床不良輸血反應(yīng)的稀有血型抗原或是表型組合是zui值得關(guān)注的，而事實(shí)證明這些稀有抗原或是表型組合往往存在于如Vel、Lan、Jk（a-b-）、Lu（a-b-）、Rhnull、OH等這些高頻率血型抗原組以及多個(gè)血型系統(tǒng)中，與此同時(shí)我們也對(duì)如Fy（a-b+）、Di（a+b-）等能引起輸血反應(yīng)和新生兒溶血病的血型抗原的中國(guó)人*的免疫反應(yīng)而進(jìn)行的篩選，并希望建立起符合我國(guó)國(guó)情的稀有血型庫(kù)。以此來(lái)解決我國(guó)臨床上的稀有血型不足、不良輸血反應(yīng)的發(fā)生等問(wèn)題來(lái)提高我國(guó)的輸血療效。
 

尿素溶血試驗(yàn)

Jk（a-b-）表型的篩選：因稀有血型本身所具有特殊性，充分利用其特點(diǎn)設(shè)計(jì)出將其篩選出的方法，Kidd血型系統(tǒng)中Jk（a-b-），此種紅細(xì)胞可在2M的尿素溶液中使其紅細(xì)胞膜在6h以上的時(shí)間內(nèi)保持完整性。而Jka和Jkb抗原的紅細(xì)胞在2M尿素溶液中*溶血的時(shí)間不超過(guò)30s。其操作過(guò)程為：選取RSP加樣器設(shè)備將標(biāo)本紅細(xì)胞稀釋到1%的懸液中，并在96孔微量板上加20ul懸液，再將100ul2mol/L尿素溶液加入其中，放置離心機(jī)中以800r/min轉(zhuǎn)速離心3min，溶血為陽(yáng)性，不溶血為陰性，如為陰性者則進(jìn)一步對(duì)血細(xì)胞做分子生物學(xué)分析。本次通過(guò)Jk（a-b-）尿素篩選實(shí)驗(yàn)，獲得8名Jk（a-b-）表型獻(xiàn)血者。

試管法

將選取標(biāo)本紅細(xì)胞稀釋為2-5%懸液，標(biāo)記試管（抗-Mur、-Lub、-Rhmull、-Kell、-MN、-H）并加入相應(yīng)抗血清和標(biāo)本紅細(xì)胞各50ul。采用直接離心法或間接抗球蛋白法，輕搖觀察結(jié)果；發(fā)生凝集為陽(yáng)性，反之為陰性，共發(fā)現(xiàn)稀·臨床研究·有血型7例。

在我們對(duì)稀有血型篩選過(guò)程中，有4種稀有血型是采用篩選稀有等位基因的方法。通過(guò)采用PCR的定點(diǎn)誘變技術(shù)，我們成功構(gòu)建出含有突變SNP位點(diǎn)的s和Oka血型等位基因的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，制備出稀有血型等位基因突變點(diǎn)片段，應(yīng)用在對(duì)照分子生物學(xué)方法篩選稀有血型。組建多個(gè)多重PCR體系，檢測(cè)等位基因。