elisa試劑盒進(jìn)程如下:
1.首先用包被緩沖液將已知抗原稀釋到1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;
2.第二日日洗刷3次;
3.加必定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗刷;
4.(一起做空白、陰性及陽性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中,參與新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育30-60分鐘,洗刷; 6.’zui終一遍用DDW洗刷。
6.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中參與暫時(shí)制造的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
7.中止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml。
8.效果斷定:可于白色布景上,直接用肉眼調(diào)查效果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)標(biāo)明。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)矩的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽性。
elisa試劑盒操作以上進(jìn)程完畢后,就可以知道效果了。
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