ELISA試劑盒各首要構成試劑的挑選

ELISA試劑盒各首要構成試劑的挑選包括以下四點，我們一同來看看。
(1) 固相載體的挑選：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方法可所以凹孔平板、試管、珠粒等?，F(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體，在運用前均可進行挑選：用等量抗原包被，在同一試驗條件下進行反響，查詢其顯色反響是不是均一性，據(jù)此判明其吸附功能是不是杰出。
(2) 包被抗體的挑選：ELISA試劑盒將抗體吸附在固相載體外表時,央求純度要好,吸附時一般央求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時刻及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃ 18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不一樣的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后，在其它試驗條件相一同，查詢陽性標本的OD值。挑選OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。關于大都蛋白質來說一般為1～10μg/ml。
(3) 酶符號抗體作業(yè)濃度的挑選：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶符號抗體部份)。然后再固定其它條件或選用“方陣法”(包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體分別為不一樣的稀釋度)在正式試驗系統(tǒng)里地滴定其作業(yè)濃度。
(4) ELISA試劑盒酶的底物及供氫體的挑選：ELISA試劑盒對供氫體的挑選央求是價廉、安全、有明顯地顯色反響，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌效果，應留神防護。有條件者應運用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是現(xiàn)在較為滿足的供氫體。底物效果一段時刻后，應參與強酸或強堿以停止反響。一般底物效果時刻，以10-30分鐘為宜。底物運用液有必要新鮮制造，尤其是H2O2在臨用前參與。