金秋時分,分享操作ELISA試劑盒的實驗重要點

ELISA試劑盒應(yīng)嚴(yán)格遵照規(guī)則操作，必能得出的成果。首先應(yīng)選取的試劑，杰出的儀器和正確的操作是確保ELISA實驗成果牢靠的必要條件。所以ELISA試劑盒的購買試劑質(zhì)量的確保以及實驗前實驗儀器的查看都是很重要的。
一、標(biāo)本的收集及保存
1、血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)防止重復(fù)凍融。
2、血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本收集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)防止重復(fù)凍融。
3、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)防止重復(fù)凍融。
4、樣本處理：血清或血漿標(biāo)本推薦稀釋10,000倍。
注：以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存，-20℃不該超越1個月，-80℃不該超越2個月；標(biāo)本溶血會影響終究檢測成果，因而溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。
二、試劑的預(yù)備 
按試劑盒說明書的要求預(yù)備實驗中需用的試劑. ELISA試劑盒中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗刷的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的.自配的緩沖液運用pH計丈量較正.從冰箱中取出的試 驗用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后運用.試劑盒中本次實驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。
 三、加樣：別離設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其他各步操作相同）、規(guī)范孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上規(guī)范品加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終究稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，悄悄晃動混勻。
四、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
五、洗刷：當(dāng)心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗刷液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
六、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，悄悄震動混勻，37℃避光顯色15分鐘.
七、測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序丈量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進行。
敘述完了以上ELISA試劑盒實驗的操作要點，能夠發(fā)現(xiàn)其實許多過程都并不雜亂，重要的是操作的時分一定要重視細(xì)節(jié)，熟能生巧，才能夠把握ELISA實驗的精華地點。