激光誘導(dǎo)熒光分析方法

熒光分析法

原理：根據(jù)物質(zhì)分子吸收光譜和熒光光譜能級躍遷機(jī)理，具有吸收光子能力的物質(zhì)在特定波長光（如紫外光）照射下可在瞬間發(fā)射出比激發(fā)光波長長的光，即熒光。熒光強(qiáng)度與物質(zhì)濃度的關(guān)系可表示為：I=kC，因此紫外熒光光強(qiáng)I與樣氣的濃度C成線性關(guān)系。這是紫外熒光法進(jìn)行定量檢測的重要依據(jù)。

兩種測定方法：

直接測定法:利用物質(zhì)自身發(fā)射的熒光進(jìn)行測定分析。

間接測定法：由于有些物質(zhì)本身不發(fā)射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發(fā)射熒光的物質(zhì)轉(zhuǎn)化成能發(fā)射熒光的物質(zhì)。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發(fā)射熒光的物質(zhì)生成絡(luò)合物，這種絡(luò)合物能發(fā)射熒光，再進(jìn)行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發(fā)熒光的無機(jī)物質(zhì)和有機(jī)物質(zhì)進(jìn)行熒光分析打開了大門，擴(kuò)展了分析的范圍。

不管是直接測定，還是間接測定，一般的采用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線法，取各種已知量的熒光物質(zhì)，配成一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定出這些標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，然后給出熒光強(qiáng)度對標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度的工作曲線。在同樣的儀器條件下，測定未知樣品的熒光強(qiáng)度，然后從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上查出未知樣品的濃度（即含量）。

一般常用的熒光分析儀器有：目測熒光儀（熒光分析燈），熒光光度計和熒光分光光度計三種。

熒光分析是一種的分析方法，它比電子探針法、質(zhì)譜法、光譜法、極譜法等都應(yīng)用的較廣泛和普及，這同熒光分析具有很多優(yōu)點分不開的。熒光分析所用的設(shè)備較簡單，如目測熒光儀和熒光光度計構(gòu)造非常簡單*可以自己制造。比起質(zhì)譜儀、極譜儀和電子探針儀來它在造價上要便宜很多倍，而且熒光分析的zui大特點是：分析靈敏度高、選擇性強(qiáng)和使用簡便。同時具備這三大特點的儀器并不多.

激光誘導(dǎo)熒光分析（LIF）

激光的特點：亮度高，方向性好，單色性好，相干性好儀器組成：與普通的熒光檢測器一樣，激光誘導(dǎo)熒光檢測器主要由光源、光學(xué)系統(tǒng)、檢測池和光檢測元件組成，兩者zui重要的區(qū)別是激光誘導(dǎo)熒光檢測器的光源是激光器。

激光器：激光器是激光誘導(dǎo)熒光檢測器的重要組成部分，用脈沖激光為光源，采用時間分辨技術(shù)可消除瑞利散射光（半徑比光或其他電磁輻射的波長小很多的微小顆粒對入射光束的散射）和拉曼散射光（光波在被散射后頻率發(fā)生變化）對測定的干擾，同時增加被測成分之間測定的選擇性。以上這些特性使激光誘導(dǎo)熒光檢測器的信噪比大大增強(qiáng)，顯示出zui高的靈敏度和較好的選擇性。

光學(xué)系統(tǒng)：激光誘導(dǎo)熒光檢測器的光學(xué)系統(tǒng)元件主要為光學(xué)透鏡和單色器。

光檢測器用兩個單色器分光，消除雜散光對熒光檢測的干擾。激發(fā)單色器將光源分光，得到所需要波長的激發(fā)光束，發(fā)射單色器用于去除干擾熒光和其它雜散光。而用激光為光源時，尤其是可調(diào)諧激光器，僅用一個發(fā)射單色器即可。用光柵分光能得到較高的信噪比，但其透光效率低，如f/4 光柵大約僅能透過入射光強(qiáng)度的0.3%。濾光片具有相對較高的透光效率（>50%）。激光本身有很好的單色性，因此很少采用帶通濾光片，采用較多的是剪切式濾光片和空間濾光片。

檢測池：常規(guī)液相色譜檢測池，采用立方形的較多。激光垂直入射到檢測池上，消除了由于激光散射產(chǎn)生的背景噪聲，提高檢測靈敏度。

光檢測元器件：可采用的光檢測元器件有光電倍增管、二極管陣列檢測器和電荷耦合器件，以光電倍增管的應(yīng)用zui為普遍。三者比較，電荷耦合器件具有較高的量子效率和信噪比，增強(qiáng)型的甚可以進(jìn)行單分子檢測。通過加和和合并，電荷耦合器件還可以進(jìn)一步提高信噪比，但價格昂貴限制了它的應(yīng)用。

應(yīng)用：化學(xué)、生物、藥物分析；司法取證鑒定；環(huán)境污染監(jiān)測；測量技術(shù)；生物體疾病診