?人半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）試劑盒說明書

人半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）試劑盒說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍： 96T

3 pmol/L -80 pmol/L

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）含量。

實驗原理

人半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）試劑盒說明書本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）水平。用純化

的人半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中

依次加入半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3），再與HRP 標記的半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）

抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在

HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的

半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），

通過標準曲線計算樣品中人半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）濃度。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（160 pmol/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份

5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

80 pmol/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

40 pmol/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

20 pmol/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

10 pmol/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

5 pmol/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，

然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此

重復5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止

液后15 分鐘以內進行。

操作程序總結：

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實際濃度。

人半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）試劑盒說明書注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在5 分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值

大于標準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計

算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月

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