T4 DNA聚合酶反應(yīng)條件優(yōu)化提高一步測(cè)序和無連接酶克隆的效率

     韓國(guó)科學(xué)家Mohammad Nazrul Islam等先前開發(fā)了一步測(cè)序和無連接酶克隆（SLIC）的方法，它簡(jiǎn)單、快速并且成本低。盡管SLIC方法通常作用效果很好，但是有時(shí)候它的克隆效率很低，可能是由于T4 DNA聚合酶室溫處理2.5min時(shí)導(dǎo)致單鏈DNA區(qū)域形成穩(wěn)定的二級(jí)結(jié)構(gòu)。為了克服這個(gè)問題，通過檢測(cè)較短T4 DNA聚合酶在很寬溫度范圍內(nèi)（25℃-75℃）的持續(xù)處理時(shí)間（5s-2.5min），韓國(guó)科學(xué)家Mohammad Nazrul Islam等開發(fā)了一種改進(jìn)的熱調(diào)節(jié)SLIC方法。當(dāng)插入的同源片段小于20bp，然后用T4 DNA聚合酶在50度處理30s，這樣的克隆效率zui高。較高的溫度下，這種較短的T4聚合酶幫助增加其兩端插入強(qiáng)二級(jí)結(jié)構(gòu)的DNA的克隆效率，增加短片段克隆的SLIC的效率。

原文：

Optimizing T4 DNA polymerase conditions enhances the efficiency of one-step sequence- and ligation-independent cloning. Mohammad Nazrul Islam, Kyeong Won Lee, Hyung-SoonYim et al. BioTechniques 63:125-130 (September 2017).