乳汁體細(xì)胞計(jì)數(shù)法

　注：本方法源自奶牛乳房炎防治技術(shù)指南（試行）（農(nóng)醫(yī)發(fā)[20l0]29號(hào)）

　　推薦使用體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行乳汁體細(xì)胞計(jì)數(shù)。

　　體細(xì)胞計(jì)數(shù)法有直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法。直接計(jì)數(shù)法中簡(jiǎn)便易行的方法是直接用顯微鏡進(jìn)行體細(xì)胞計(jì)數(shù)（SCC），間接計(jì)數(shù)法就是后面提到的CMT。法。

　　l主要試劑和材料

　　美藍(lán)染色液：美藍(lán)乙醇飽和溶液30mL.（美藍(lán)2g，95％乙醇100mL），10％氫氧化鈉溶液0.1mL，蒸餾水100mL，將上列溶液混合搖勻，過(guò)濾后備用。二甲苯、95％乙醇。生物顯微鏡、載玻片、l0μL。微量加樣器（或移液槍）等。

　　2操作方法

　　2.1涂片制備

　　涂布：充分搖勻新鮮乳樣，用l0μL微量加樣器吸取中部乳汁l0μL，或用接種環(huán)蘸取等量的乳汁，將乳樣滴于玻片一端中側(cè)，仔細(xì)涂布成約lcm2。面積的乳膜（為便于操作，可在玻片下墊襯一張硬紙板，紙板上用毛筆劃數(shù)個(gè)面積為lcm2的方格透視）。

　　干燥、脫脂、固定：涂好乳膜的玻片于37℃溫箱中干燥，然后用二甲苯脫脂5min，再置95％乙醇中固定5～10min。

　　染色：玻片干燥后，用美藍(lán)染色液染色5min。水洗，再用95％乙醇脫色數(shù)分鐘，水洗干燥后鏡檢。

　　鏡檢及計(jì)數(shù)：在生物顯微鏡油鏡下觀察（用l0×目鏡，其視野直徑要求為0.016），計(jì)數(shù)100個(gè)視野內(nèi)的細(xì)胞數(shù)，然后用下式計(jì)算：SCC=100xN／Лr2

　　視野面積Лr2=3.1416×（0.016／2）2。=0.0002cm2，

　　顯微鏡系數(shù)N=I／0.0002×100=500,000

　　SCC=系數(shù)×每個(gè)視野的細(xì)胞平均數(shù)（即細(xì)胞總數(shù)÷100）：細(xì)胞數(shù)／mL乳。

　　3判定標(biāo)準(zhǔn)

　　隨著和國(guó)內(nèi)乳品行業(yè)的接軌，國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)也在提高，一般以每毫升牛奶中含20萬(wàn)個(gè)細(xì)胞為亞臨床乳房炎的臨界值（+）；超過(guò)該值為陽(yáng)性，低于該值則正常。