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ELISA試劑盒實驗步驟解析:
A、加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔,空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣時將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,給酶標板覆膜,37℃孵育2小時,為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
B、棄去液體,甩干,每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內配制),酶標板加上覆膜,37℃溫育1小時。
C、棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約350μl /每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內液體拍干。
D、每孔加工作液(臨用前15分鐘內配制)100μl,加上覆膜,37℃溫育1小時。
E、棄去孔內液體,甩干洗板5次,方法同步驟C。
F、每孔加底物溶液100μl,酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據實際顯況酌情縮短或延長,但不可超過30分鐘,當標準孔出現明顯梯度時,即可終止)。
G、每孔加終止液50μl,終止反應,此時藍色立轉,終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。
H、立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值),應提前打開酶標儀電源,預熱儀器,設置好檢測程序。
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