激情盛夏,ELISA法檢測AB含量的方法

 ELISA),先將ABA蛋白質(zhì)復(fù)合物與固相載體(聚苯乙烯微量滴定板)結(jié)合,然后將待測的ABA(樣品或規(guī)范品)和兔抗ABA抗體參加微量滴定板的孔中,進行競賽反響,接著棄去上清液,洗刷固相表面,參加酶標二抗使其與結(jié)合在固相ABA上的抗體反響,終去除剩余的未反響的酶標二抗,測定與固相結(jié)合的酶活性,酶活性和待測ABA含量呈負函數(shù)關(guān)系,即固相ABA結(jié)合的抗體與酶標二抗量(OD或B%)隨待測ABA含量添加而削減,以一系列已知濃度的ABA的OD值制圖而取得規(guī)范競賽性抑制曲線,關(guān)于不知道樣品B,只要在相同條件下測定反響后的OD值,就可以從規(guī)范曲線上查到ABA的量。
 測定辦法 ELISA辦法是一種固相抗原型酶聯(lián)免疫法(enzyme Linked Immuno Sorbent Assay 
1.包被：在微量滴定板內(nèi)參加100μLABA包被液，37℃濕盒過夜。 
2.標樣稀釋?：取8支試管每管加150μLDB，管中參加50μL（2000ng/50μL）規(guī)范液，充沛渦旋后，取50μL至第二號管中，相同渦旋后，取50μL到第三管；順次稀釋到第六管，稀釋后的規(guī)范ABA順次為1000ng、500ng、250ng、125ng、62.5ng、31.25ng、15.625ng、7.8125ng/50μL。 
3. 洗板：從37℃濕盒中取出滴定板，康復(fù)到室溫后，棄去包被液，用WB（洗刷緩沖液）洗刷三次，甩干（吸水紙）。 
4.加樣：1～8孔對應(yīng)參加ABA標樣50μL，10號孔相應(yīng)參加濃ABA標樣，9號孔加50μLDB，三排重復(fù)；然后每孔加50μL抗體，37℃ 45分鐘。 
5.洗板： 
6.加酶標二抗：每孔加100μL，37℃反響1小時。 
7.洗板： 
8.顯色：各孔加10μLOPD顯色液，37℃ 20分鐘。 
9.停止反響：各孔加50μL 6NH2SO4。 
10.讀數(shù)：490nm讀取OD值。其間10號孔調(diào)零,而9號孔為大值(B0),1~8號孔的OD值為B。

11.成果計算：以In（B/B0）∕（1－B/B0）為縱坐標，以規(guī)范ABA濃度的常用對數(shù)（lg［ABA］）為橫坐標,繪制曲線。

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