影響ELISA試驗(yàn)效果常見問題原因分析及解決辦法

操作步驟

可能原因

解決辦法

選擇試劑

選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

加   樣

1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；
2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)；
3.加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。

1.標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2.加樣后及時(shí)放入孵箱。
3.加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4.如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5.標(biāo)本較多時(shí)，請分批操作。

孵   育

1.孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*；
2.孵育時(shí)間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。

1.貼封片或加蓋；
2.按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。

洗   板

1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2.采用半自動洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。
3.反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。

1.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
2.合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。

顯   色

1. 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑；
2. 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。

1. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用；
2. 加樣時(shí)保持顯色劑不外流；
3.A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。

終   止

加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。

加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

讀   板

讀板時(shí)板底不清潔。

應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。

全過程

1.整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸;
2.實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。