產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>儀器文獻(xiàn)>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

來源:上海喆圖科學(xué)儀器有限公司   2019年03月14日 15:46  

1. 培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì),是進(jìn)行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。
 

  2. 常見的培養(yǎng)基包括:液體狀態(tài)的液體培養(yǎng)基,可用于工業(yè)生產(chǎn);添加了凝固劑(如瓊脂)的固體培養(yǎng)基,常用于微生物分離、鑒定,活菌計(jì)數(shù),菌種保藏等,微生物在固體培養(yǎng)基表面生長可形成肉眼可見的菌落。
 

  3. 培養(yǎng)基一般都含有水、碳源(包括無機(jī)碳源如CO2、有機(jī)碳源如葡萄糖)、氮源(包括無機(jī)氮源如NH3、有機(jī)氮源如蛋白質(zhì))和無機(jī)鹽。
 

  4. 培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)(即生長因子)以及氧氣的要求。
 

  5. 獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵。
 

  6. 消毒是使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子);滅菌是使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。
 

  7. 常用的消毒方法:煮沸消毒法(在100 ℃煮沸5~6 min),日常生活中常用于一般物品的消毒;巴氏消毒法用水浴鍋操作(在70~75 ℃煮30 min或在80 ℃煮15 min),用于一些不耐高溫的液體,如牛奶的消毒;化學(xué)藥劑消毒法,如用酒精擦拭雙手、用Cl?消毒水源等;紫外線消毒法(紫外燈照射30 min),用于接種室、操作臺的表面滅菌和空氣滅菌。
 

  8. 常用的滅菌方法:灼燒滅菌(酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒),用于接種工具或其他金屬用具的滅菌和試管口或瓶口的滅菌;干熱滅菌(在干熱滅菌箱內(nèi)160~170 ℃加熱1~2 h),用于玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬工具等的滅菌;高壓蒸汽滅菌(在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)壓力為100 kPa,溫度為121 ℃的條件下15~30 min),用于培養(yǎng)基及容器的滅菌。
 

  9. 制作Meat extracts, beef蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟:①計(jì)算各成分的用量;②稱量,注意要使用稱量紙、動(dòng)作要迅速、稱后及時(shí)蓋瓶蓋;③溶化,注意將Meat extracts, beef連同稱量紙一起放入燒杯,保證粘附在稱量紙上的Meat extracts, beef也能溶入水中;④滅菌,將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至錐形瓶,加棉塞,包上牛皮紙,在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)滅菌15~30min,將5~8套培養(yǎng)皿用幾層報(bào)紙包緊作一包,在干熱滅菌箱內(nèi)滅菌2h;⑤倒平板,培養(yǎng)基50℃左右時(shí)在酒精燈火焰附近操作。
 

  10. 倒平板時(shí)要注意:全程在酒精燈火焰附近操作;錐形瓶的瓶口通過火焰灼燒滅菌,防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基;培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙即可;等待平板冷卻凝固(大約需5~10min)后,將平板倒過來放置,既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā),又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。
 

  11. 菌落是單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí),形成的肉眼可見的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體。
 

  12. 平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面,MAX終分離得到單菌落。
 

  13. 接種環(huán)的灼燒:①劃線前:消滅接種環(huán)上的微生物,避免污染培養(yǎng)物;②每次劃線前:殺死接種環(huán)上的殘留菌種,保證每次劃線菌種來自上次劃線末端;③劃線結(jié)束后:殺死接種環(huán)上的殘留菌種,避免污染環(huán)境和感染操作者。
 

  14. 灼燒接種環(huán)之后,要冷卻后再進(jìn)行操作,以免接種環(huán)溫度太高殺死菌種。
 

  15. 第二次劃線以及其后的劃線操作,要從上一次劃線的末端開始劃線,使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線的次數(shù)增加而逐步減少,MAX終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。
 

  16. 稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布在瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞,從而在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。其主要操作步驟包括系列稀釋操作和涂布平板操作。
 

  17. 稀釋涂布平板法操作時(shí),應(yīng)注意以下操作以防止雜菌污染:每支試管及其中的9 mL水、移液管等均需滅菌;操作時(shí),試管口和移液管應(yīng)在離火焰1~2 cm處;涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70%酒精消毒,取出時(shí),讓多余酒精在燒杯中滴盡,然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃;移液管管頭不要接觸任何物體。
 

  18. 稀釋涂布平板法可用于微生物計(jì)數(shù),但需涂布多個(gè)平板,操作較復(fù)雜。
 

  19. 未接種的培養(yǎng)基可作為空白對照,若其在恒溫箱保溫1~2d后無菌落生長,說明培養(yǎng)基的制作是成功的,否則需要重新制備。
 

  20. 若接種成功,在培養(yǎng)基的表面可觀察到大小、形狀、顏色相似的菌落。
 

  21. 對于頻繁使用的菌種,可以采用臨時(shí)保藏的方法。將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上,在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長成后,將試管放入4℃的低溫培養(yǎng)箱中保藏。以后每3~6個(gè)月,都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。
 

  22. 菌種的臨時(shí)保藏方法保存的時(shí)間不長,菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。
 

  23. 對于需要長期保存的菌種,可以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中,裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中,與甘油充分混勻后,放在-20℃的低溫培養(yǎng)箱中保存。
 

  以上設(shè)備詳情,請咨詢上海喆圖儀器廠

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618