紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)含量方法

來源：上海旦鼎國(guó)際貿(mào)易有限公司 2019年05月04日 23:15

1. 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 儀器與試劑：
Labtech UV POWER紫外分光光度計(jì)；玻璃比色皿一套；考馬斯亮藍(lán)G250；
牛血清蛋白；*純水。
1.2 試液的制備：
牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000ug/ml）的制備稱取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入*純水溶解并定容。
考馬斯亮蘭G250試劑稱取100mg考馬斯亮蘭G250，溶于50ml95％的乙醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀釋至1升。

2. 結(jié)果與討論
2.1 校正曲線的繪制
準(zhǔn)確吸取1000ug/ml牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml分別加入到6只10ml試管中，然后用*純水補(bǔ)充到0.1ml，各試管分別加入5ml考馬斯亮蘭G250試劑，混合均勻后，即可依次在595nm處測(cè)定吸光度。以濃度
為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制校正曲線如下圖，校正曲線方程為A=0.613556C+0.001008，R=0.9994。

2.2 精密度
配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考馬斯亮蘭溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，得到吸光度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

表1 精密度測(cè)定結(jié)果

次數(shù)	1	2	3	4	5	6	RSD%
A	0.2626	0.2622	0.2620	0.2628	0.2629	0.2626	0.13

2.3 穩(wěn)定性
取1mg/ml牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液每十分鐘測(cè)定一次，50分鐘內(nèi)的吸光度變化如下表2。
表2 穩(wěn)定度測(cè)定結(jié)果

時(shí)間（min）	A₁	A₂	A₃	A_平均
0	0.5511	0.5523	0.5516	0.5517
10	0.5204	0.5184	0.5168	0.5185
20	0.4910	0.4901	0.4903	0.4905
30	0.4765	0.4716	0.4721	0.4734
40	0.4524	0.4475	0.4440	0.4480
50	0.3982	0.3935	0.4031	0.3983

3. 結(jié)論
該方法測(cè)定快速、簡(jiǎn)便，干擾物少，是目前靈敏度較高的蛋白質(zhì)含量測(cè)定的紫外分光光度法

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