青蒿素與菌液測定的前世今生

來源：上海寶予德科學(xué)儀器有限公司 2019年07月01日 14:28

前言
由屠呦呦團(tuán)隊(duì)深度開發(fā)的青蒿素研究，在近有了新的進(jìn)展-通過增加用藥周期和聯(lián)合用藥解決瘧原蟲對其耐藥性[1]。而青蒿素也面臨著價格昂貴及供應(yīng)不足的難題，研究者利用菌體構(gòu)建合成青蒿素的前體的研究[2]能夠提供參考思路。

菌體的生長情況可用OD600初步判斷菌落生長情況并間接測定菌落的密度,

是因?yàn)槟程囟úㄩL下，菌懸液的細(xì)胞濃度僅在一定的范圍內(nèi)與對應(yīng)的吸光度值呈正比關(guān)系，不同的是，針對非球狀的放線菌和某些霉菌等以及培養(yǎng)基中有其他渾濁物質(zhì)則不能通過該方法推斷濃度。

如果菌液OD600在0.6-0.8之間，表明細(xì)菌處于旺盛生長的對數(shù)生長期細(xì)胞生長，OD600>3表明細(xì)菌已經(jīng)飽和等，這些僅僅是粗略估計菌落的生長情況。

想要知道較為的菌落濃度，需要將制備好的菌懸液梯度稀釋后，以未加菌液的培養(yǎng)基做空白對照，使用分光光度計分別測定OD600；并用平板計數(shù)法計算菌落總數(shù)。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，來推算未知濃度菌液的生長狀態(tài)。

若某一菌液的OD值為負(fù)，可能是細(xì)菌與培養(yǎng)基發(fā)生變色反應(yīng)，顏色的改變影響吸光度數(shù)值。菌液在測定前保持懸浮狀態(tài)能夠保證測定的準(zhǔn)確性。

由于600nm處對濁度的敏感度高，常用600nm為檢測波長，也可以對菌液進(jìn)行全波長掃描，在其大吸收峰波長下進(jìn)行測定。

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小寶出品的 Micro Drop 超微量分光光度計可檢測OD600，雙上樣方式全波長掃描，

光程可自動調(diào)節(jié)：小檢測光程0.05mm，高濃度樣本可不用稀釋直接測量

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[1] Wang J, Xu C, Liao F L, et al. A Temporizing Solution to “Artemisinin Resistance”[J]. New England Journal of Medicine, 2019.

[2]吳濤, 吳勝明, 殷晴, 等. 在大腸桿菌內(nèi)引入甲羥戊酸途徑合成抗瘧藥青蒿素前體——紫穗槐-4,11-二烯[J]. 生物工程學(xué)報, 2011, 27(7).

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