熒光偏振理論

Perrin于1926年首先描述了熒光偏振理論，他觀察到溶液中的熒光分子在受到偏振光激發(fā)時，如果在激發(fā)時分子保持靜止，該分子將發(fā)出固定偏振平面的發(fā)射光（發(fā)射光仍保持偏振性）。然而，如果分子旋轉(zhuǎn)或翻轉(zhuǎn)那么發(fā)射光的偏振平面將不同于初始激發(fā)光的偏振平面。

分子的偏振性與分子旋轉(zhuǎn)馳豫時間成比例，分子旋轉(zhuǎn)馳豫時間是分子轉(zhuǎn)過 68.5度角時所用的時間。 分子旋轉(zhuǎn)馳豫時間與粘度、溫度、分子體積和氣體常數(shù)有關。

原理 ： 當熒光分子受平面偏振光激發(fā)時，如果分子在受激發(fā)時期（對于熒光素約持續(xù) 4納秒）保持靜止，發(fā)射光將位于同樣的偏振平面。如果在受激發(fā)時期，分子旋轉(zhuǎn)或翻轉(zhuǎn)偏離這一平面，發(fā)射光將位于與激發(fā)光不同的偏振面。 如果用垂直的偏振光激發(fā)熒光素，可以在垂直的和水平的偏振平面檢測發(fā)射光光強（發(fā)射光從垂直平面偏向水平平面的程度與熒光素標記的分子的遷移率有關）。如果分子很大，激發(fā)時發(fā)生的運動極小，發(fā)射光偏振程度較高。如果分子小， 分子旋轉(zhuǎn)或翻轉(zhuǎn)速度快，發(fā)射光相對于激發(fā)光平面將去偏振化。 熒光顯微鏡 

熒光偏振的定義：

熒光偏振的應用  http://www.leikon.cn

熒光偏振是特別用于研究分子間相互作用的技術。這種方法直接及時的檢測示蹤分子的結(jié)合 /自由率。熒光偏振實驗在沒有固相支持的溶液中進行，允許在低至皮摩爾級的范圍內(nèi)分析真實的平衡。熒光偏振檢測并不摻雜樣品，因此樣品可以被再次處理并被重新分析用于評價 pH、溫度和鹽濃度改變對結(jié)合的影響。此外，熒光偏振實驗是實時進行的，并不局限于平衡結(jié)合的研究。

應用領域概述  http://www.shkon.com

•  受體 /配體研究（如激素/受體檢測）

•  蛋白質(zhì) /多肽相互作用

•  DNA/蛋白質(zhì)相互作用

•  酪氨酸激酶檢測

•  競爭性免疫檢測

熒光偏振技術的優(yōu)勢

熒光偏振技術比研究蛋白質(zhì)與核酸結(jié)合的傳統(tǒng)方法具有更多優(yōu)勢（特別是不生成有害的放射性廢物）并且檢測限更低，可達亞納摩爾級范圍。此外熒光偏振是真正均相的，允許實時檢測（動力學檢測），對于濃度變化不敏感，是均相檢測形式（中間不含洗滌步驟）的*解決方案。

熒光偏振  http://www.shkon.com.cn

ACTA POLYMERICA SINICA No. 4 （ 1998 ）