哺乳動物細胞實驗室的構(gòu)建方案

一、實驗室設(shè)計

細胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養(yǎng)室和設(shè)計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養(yǎng)室的設(shè)計原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，為10萬級潔凈環(huán)境的潔凈室。而洗刷消毒工作設(shè)在潔凈室外，避免物品污染潔凈室內(nèi)環(huán)境。

細胞潔凈室需要一個空調(diào)系統(tǒng)并對外界保持一定的正壓。

二、實驗室設(shè)備

1、超凈工作臺/生物安全柜

細胞培養(yǎng)需要無菌要求高的環(huán)境，在進行操作細胞的實驗時，需要在100級的空氣下進行，那我們就需要購買能提供百級潔凈度的超凈工作臺或生物安全柜了。

對絕大多數(shù)實驗來說，超凈工作臺已經(jīng)可以*實驗員的操作需要。至于超凈臺的尺寸，要看實驗室的大小以及人員的多少來確定，是買單人的還是雙人的，是買單面的還是雙面的，以及買幾臺等等。

如果操作的實驗具有生物危險性，則應(yīng)選擇較之超凈臺更加的生物安全柜。安全柜和超凈臺在使用上沒有多大區(qū)別，但是安全柜對人員具有保護，適用于那些對人體有害的病毒或細胞細菌等實驗。需要說明的是，超凈臺或安全柜的擺放應(yīng)當(dāng)避開房門，空調(diào)等擾動附近氣流的地方。

2、  二氧化碳培養(yǎng)箱

通常來說，細胞培養(yǎng)所用的緩沖體系是碳酸氫鈉+HEPES體系，所以需要二氧化碳提供緩沖能力維持pH。這時我們就需要一個二氧化碳培養(yǎng)箱來對細胞進行培養(yǎng)。并且由于二氧化碳培養(yǎng)箱通常不具有制冷壓縮機，所以需要用戶確定其細胞房內(nèi)在夏天也有全天候的空調(diào)制冷，否則會造成箱內(nèi)溫度超標(biāo)。另外二氧化碳培養(yǎng)箱也分為氣套式和水套式，所謂的氣套式就是直接的電熱絲加熱，箱體升溫較快，但是溫度精度及保溫效果會稍差；而水套式則利用浸泡在水中的電熱絲加熱包裹在箱體內(nèi)膽外的水套來達到控溫的效果，其升溫慢但是保溫的效果良好，即使短時間發(fā)生斷電也不怕影響箱體內(nèi)的細胞生長。

3、  倒置顯微鏡

細胞培養(yǎng)的器皿厚度較大，傳統(tǒng)的正置顯微鏡焦場不夠，所以無法觀察到貼在培養(yǎng)器皿底部的細胞，這時我們則需要倒置顯微鏡的幫助。對于一些熒光免疫細胞實驗（IF），則還需要購買倒置的熒光顯微鏡。

4、  純水機/超純水機

細胞培養(yǎng)還需要超純水系統(tǒng)，普通的純水和蒸餾水是無法用于細胞培養(yǎng)的，而超純水主要用于配置一些培養(yǎng)基和試劑，超純水的進水可為自來水或二級純水（質(zhì)量好些的去離子水，電阻10兆歐左右），細胞培養(yǎng)用水除了超純以外，zui主要對內(nèi)毒素有嚴(yán)格的要求，所以在挑選超純水機的時候就要挑選含超濾組件的機型。

5、  離心機

細胞培養(yǎng)需要離心收集傳代細胞，一般轉(zhuǎn)速在1000轉(zhuǎn)到1500轉(zhuǎn)之間，所以需要購買低轉(zhuǎn)速的常溫離心機，而且要帶10ml，50ml及培養(yǎng)板的轉(zhuǎn)子。另外還需要一臺高速冷凍離心機用于收集細胞沉淀或細胞上清。

6、  液氮罐

培養(yǎng)哺乳動物細胞肯定會建立一個細胞庫，這樣液氮罐就是必須的，放入液氮罐內(nèi)的凍存細胞一般可以保證在近十年的時間內(nèi)都具有生物活性，至于需要多大的液氮罐要根據(jù)細胞庫的大小而定。

7、  低溫冰箱

細胞在凍存時需要存放-70到-80度過夜再放入液氮罐，這樣則需要一個低溫冰箱。

三洋等低溫冰箱。

8、  傳遞窗

細胞房在構(gòu)建時要與外界隔絕，這樣就需要購買傳遞窗來傳遞物品，減少污染的幾率，并且將所有進入細胞室的物品都在傳遞窗內(nèi)進行紫外殺菌，可以保證潔凈室的安全。

9、  高壓滅菌鍋

各類細胞實驗室器皿在使用前后都需要做滅菌處理，滅菌條件一般為121℃，20~30分鐘，這樣就需要一臺放置在潔凈室外的高壓滅菌鍋來保障生物安全性。

10、 移液槍，電動移液槍

細胞實驗操作時，需要使用各種吸頭及移液管，所以配置移液槍是必要的。

有Eppendorf，Gilson，IBS，Jet，BIO-HIT等各*的移液槍供客戶選擇。

11、細胞培養(yǎng)中需要的各種耗材

    各類細胞培養(yǎng)板，細胞培養(yǎng)瓶，平皿移液管等，品牌包括Greiner，Corning，Jet等。

12、大規(guī)模培養(yǎng)設(shè)備

如今細胞用于商業(yè)生產(chǎn)更多會使用到懸浮培養(yǎng)的方法，而懸浮培養(yǎng)中會使用到轉(zhuǎn)瓶，搖瓶或細胞發(fā)酵罐；比較老的貼壁培養(yǎng)的方法，會使用到細胞滾瓶。

13、其余一些可能用到的儀器

對于細胞實驗還可能需要振蕩器及磁力攪拌器用于混勻液體；還有一些沾滿細胞的難清洗的不銹鋼類或玻璃類器皿，則需要超聲波清洗機的幫助；如果涉及免疫實驗，肯定需要冰浴，碎冰的需求量大的話，則需要購買制冰機；另外破碎細胞可能會需要超聲波細胞破碎儀；zui后需提及的是如果細胞房較大，則要配備手推車，實驗時搬動那些液體培養(yǎng)基總是件折磨人的事情。

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