色譜柱在分析中的經(jīng)驗(yàn)

Q1:色譜柱是否可以反沖，那什么柱子可以反沖，什么不可以?反沖后是正著用，還是反著用?

這是一個(gè)困擾很多液相使用者的問(wèn)題。
很多人說(shuō)，如果色譜柱柱頭堵了，壓力升高了，反沖完了效果很好！
也有很多人，包括廠商的工程師說(shuō)不建議反沖，沖了會(huì)影響柱效。
多種說(shuō)法眾說(shuō)紛紜，讓這個(gè)問(wèn)題幾乎成了一個(gè)業(yè)界之謎。
那么，今天我們就來(lái)分析討論一下，色譜柱到底能不能反沖，以及背后的原因是什么？
我們都知道，大多數(shù)液相色譜柱里面充滿(mǎn)了直徑幾個(gè)微米的硅膠小球，這些硅膠小球在高壓條件下被填入了色譜柱以后，色譜柱的兩端需要用篩板封起來(lái)，這樣既能夠讓流動(dòng)相順利通過(guò)，又保硅膠小球老老實(shí)實(shí)呆在色譜柱里面，不會(huì)跟著流動(dòng)相跑出來(lái)。
當(dāng)然篩板的孔徑要夠小，不然就封不住硅膠小球。
但是入口篩板孔徑如果做得特小，也會(huì)產(chǎn)生一個(gè)問(wèn)題，那就是很容易被樣品堵塞。樣品稍微有一點(diǎn)沒(méi)處理好，或者沒(méi)有溶解好，篩板就被堵了，柱壓就升高了，至柱子就廢掉了。
所以，很多廠商就決定把色譜柱入口的篩板孔徑做得比出口篩板的孔徑大一些，這樣既能保硅膠小球不會(huì)被沖出色譜柱，也能讓柱頭不那么容易堵塞。
但是，這種情況下，色譜柱往往就不能反沖了。
因?yàn)槿绻礇_，在把堵塞在入口篩板上的污染物沖出來(lái)的同時(shí)，柱頭的填料可能也會(huì)被沖出來(lái)，造成柱效的降，至色譜柱的報(bào)廢。
說(shuō)到這里，我們總結(jié)一下：
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如果色譜柱出入口篩板孔徑一樣的話(huà)，那就可以反沖，正反使用都無(wú)所謂，即使是色譜柱上面標(biāo)注了方向（還需注意色譜柱的填料基質(zhì)）。
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但是如果色譜柱出入口篩板孔徑不一樣的話(huà)（一般是入口孔徑大于出口孔徑），反沖就有可能造成填料漏出，柱效降等等。


Q2:如果柱子取下來(lái)放置一段時(shí)間，需要做什么保護(hù)嗎?

對(duì)一般的反相柱，也就是洗干凈后放到純甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中，然后用堵頭塞緊柱兩頭，以免保存溶劑揮發(fā)，應(yīng)該不需要做殊的保護(hù)。

Q3:多個(gè)樣品不好不離的時(shí)候，請(qǐng)問(wèn)該怎么通過(guò)選擇合適的柱子來(lái)提分離度?

提分離度可從三個(gè)主要影響因素來(lái)考慮，柱效、選擇性和保留因子?？赏ㄟ^(guò)減小填料粒徑和增加柱長(zhǎng)提柱效;選擇性和固定相選擇以及pH 條件有關(guān)，通過(guò)選擇合適的色譜柱和合適的pH，可以提選擇性;有時(shí)候適當(dāng)延出峰時(shí)間增加保留因子，也可提分離度。

Q4:因?yàn)椴恢懒鲃?dòng)相已走完，液相色譜柱空走了大概一晚上，請(qǐng)問(wèn)這種情況下柱子還能用嗎?如果可以應(yīng)該如何再生?

還能用的?？赡苤永飼?huì)有氣泡進(jìn)去，但之后多用流動(dòng)相沖沖，看到基線(xiàn)穩(wěn)定，就沒(méi)問(wèn)題了。用色譜柱的保存液低流速長(zhǎng)時(shí)間沖洗，然后再檢測(cè)一下柱效，看柱子是否恢復(fù)，液相建議設(shè)置一下壓限，這樣就不怕流動(dòng)相光而會(huì)色譜柱。